فعالية المکافحة الحيوية للبکتيريا Bacillus subtilis ضد الفطريات Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani في المختبر والمشتل EFFECTIVENESS OF BIOLOGICAL CONTROL BY BACILLUS SUBTILIS AGAINST THE PLANT PATHOGENIC FUNGI FUSARIUM OXYSPORUM F. SP. LYCOPERSICI, F.SOLANI, RIZHOCTONIA SOLANI IN VITRO AND NURSERY | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Assiut University Bulletin for Environmental Researches | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Article 6, Volume 21.2, Issue 2, October 2018, Pages 37-45 PDF (2.26 M) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Document Type: Original Article | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| DOI: 10.21608/auber.2018.133189 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Abstract | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| الملخص العربي : نفذت الدراسة في مختبر وصوبة قسم علو الحياة في جامعة عدن - اليمن في الفترة من اکتوبر الى ديسمبر 2017م. حيث تعتبر الفطرياتFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani من الکائنات المسببة لمرض الذبول الفيوزاريومي للطماطم Lycopersicon esculentum Mill. وقد تم اختبار بکتيرياBacillus subtilis کعامل مکافحة حيوية لمعرفة فعاليتها ضد هذه الفطريات في المختبر من خلال منطقة التثبيط والقدرة على التثبيط کنسبة مئوية. وأظهرت نتيجة التحليل المختبري انها کانت فعالة ضد الفطر F. solani يليه الفطر Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici ثم الفطر Rizhoctonia solani بنسبة تثبيط وصلت الى 94.95، 92.00، 77.14% على التوالي ووجدت فروق معنوية عالية عند (p=0.05) مقارنة بالشاهد. وعند اختبار انبات بذور الطماطم المعالجة بهذه البکتيريا في الصوبة وجد أن النسبة المئوية الاعلى لإنبات البذور التي تعرضت للفطر F. solani قد وصلت إلى 85% تليها البذور التي تعرضت للفطر Fusarium oxysporum f. sp < /em>. lycopersici حيث وصلت إلى 75% ثم البذور التي تعرضت للفطر Rizhoctonia solani (55%) بينما لم تتجاوز البذور المنبتة في الشاهد 20%. اما مؤشرات النمو (طول الجزء الهوائي، وطول الجذور) فقد اظهرت المعالجات بالبکتيريا B. subtilis ضد فطريات الذبول فعالية عالية ووجدت فروق احصائية معنوية جدا عند 0.05% بين المعاملات المختلفة مع بعضها وبين المعاملات المختلفة من جهة والشاهد من الجهة الاخرى وکان التأثير الاعلى ضد الفطر F. solani حيث وصل طول الجزء الخضري وطول الجذور الى (1.45±38.50 ملم) و(51.5±30.45 ملم) على التوالي مقارنة بالشاهد الذي کان (1.65±22.35 ملم) و(1.45±18.35 ملم) على التوالي. هذه النتيجة أوضحت أن البکتيرياB. subtilis هي عوامل فعالة ينبغي تسخيرها لمزيد من تطبيقات المکافحة الحيوية. ABSTRACT: The study was carried out in the Laboratory and Nursery of Biology Department at the University of Aden - Yemen during October - December 2017. Fusarium oxysporum f. sp < /em>. lycopersici, F. solani, Rizhoctonia solani. The organisms that cause fusarium disease for tomatoes Lycopersicon esculentum Mill. Bacillus subtilis has been tested as a vital control agent for its effectiveness against these fungi in vitro through inhibition of mycelial growth. Result of laboratory experiments showed that it was effective against the fungus F. solani followed by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici followed by Rizhoctonia solani with an inhibition ratio of 94.95%, 92.00% and 77.14%, respectively, and significant differences were found at (p = 0.05) compared to the control. When tested for germination of tomato seeds treated with these bacteria in the greenhouse, it was found that the highest percentage of germination of seeds that fell prey to F. solani had reached 85% followed by the seeds that were exposed to the fungus Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (75%), Rizhoctonia solani (55%), and untreated seeds (20%). The growth parameters (length of the air segment and length of the roots) showed the treatment of B. subtilis bacteria against high fungus fungi and found significant statistical differences at 0.05% between the different transactions with each other and the different treatments on one hand and the other side and the highest impact against F. solani, where the length of the green portion and length of the roots reached 1.45 ± 38.50 mm and 51.5 ± 30.45 mm respectively compared to 1.65 ± 22.35 mm and 1.45 ± 18.35 mm respectively. This result showed that B. subtilis bacteria are vital agents that should be harnessed for more biological control applications. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Highlights | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
فعالية المکافحة الحيوية للبکتيريا Bacillus subtilis ضد الفطريات Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani في المختبر والمشتل محمد علي محمد السنيديقسم الاحياء - کلية التربية/ صبر - جامعة عدن m_alsunaidi@yahoo.com الملخص العربي : نفذت الدراسة في مختبر وصوبة قسم علو الحياة في جامعة عدن - اليمن في الفترة من اکتوبر الى ديسمبر 2017م. حيث تعتبر الفطرياتFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani من الکائنات المسببة لمرض الذبول الفيوزاريومي للطماطم Lycopersicon esculentum Mill. وقد تم اختبار بکتيرياBacillus subtilis کعامل مکافحة حيوية لمعرفة فعاليتها ضد هذه الفطريات في المختبر من خلال منطقة التثبيط والقدرة على التثبيط کنسبة مئوية. وأظهرت نتيجة التحليل المختبري انها کانت فعالة ضد الفطر F. solani يليه الفطر Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici ثم الفطر Rizhoctonia solani بنسبة تثبيط وصلت الى 94.95، 92.00، 77.14% على التوالي ووجدت فروق معنوية عالية عند (p=0.05) مقارنة بالشاهد. وعند اختبار انبات بذور الطماطم المعالجة بهذه البکتيريا في الصوبة وجد أن النسبة المئوية الاعلى لإنبات البذور التي تعرضت للفطر F. solani قد وصلت إلى 85% تليها البذور التي تعرضت للفطر Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici حيث وصلت إلى 75% ثم البذور التي تعرضت للفطر Rizhoctonia solani (55%) بينما لم تتجاوز البذور المنبتة في الشاهد 20%. اما مؤشرات النمو (طول الجزء الهوائي، وطول الجذور) فقد اظهرت المعالجات بالبکتيريا B. subtilis ضد فطريات الذبول فعالية عالية ووجدت فروق احصائية معنوية جدا عند 0.05% بين المعاملات المختلفة مع بعضها وبين المعاملات المختلفة من جهة والشاهد من الجهة الاخرى وکان التأثير الاعلى ضد الفطر F. solani حيث وصل طول الجزء الخضري وطول الجذور الى (1.45±38.50 ملم) و(51.5±30.45 ملم) على التوالي مقارنة بالشاهد الذي کان (1.65±22.35 ملم) و(1.45±18.35 ملم) على التوالي. هذه النتيجة أوضحت أن البکتيرياB. subtilis هي عوامل فعالة ينبغي تسخيرها لمزيد من تطبيقات المکافحة الحيوية. الکلمات المفتاحية: Bacillus subtilis, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rizhoctonia solani, المکافحة الحيوية، الطماطم.
المقدمة يوجد عدد کبير من مسببات الأمراض التي تنقلها التربة وتصيب الکثير من المحاصيل وتسبب لها أضرارا کبيرة (Babalola and Glick, 2012). ومن أهمها الذبول الفيوزاريومي. الذي يعتبر مرضًأ مدمرًا لنباتات الطماطم ويتسبب في الکثير من الخسائر للمزارعين في جميع أنحاء العالم. تبدأ الأعراض کاصفرار تدريجي والذبول للأوراق السفلية (Khan and Khan, 2002) وينجم ذلک عن نمو الکونيديات الصغيرة Microconidia في الخلايا الداخلية للخشب في الجذر والساق وبالتالي فشل الخشب المصاب في توصيل المتطلبات من الماء الى النبات وفي الآخر موت النبات يکون امر لا مفر منه (Burgess et al., 2008). ويتم تحرر الأبواغ الکونيدية Conidia في الأنسجة المحيطة عندما يموت النبات. وهذه الابواغ تشکل في وقت لاحق الابواغ الکلاميدوية Chlamydospores التي تنتقل الى التربة (Jones, 2000). ويمکن أن تبقى هذه الابواغ في التربة لمدة تصل إلى 30 سنة حتى تتوفر ظروف مواتية وتنتشر مرة اخرى وتصيب نباتات جديدة (Thangavelu et al.,2004 ). يتم اليوم استخدام العديد من الکائنات الحية الدقيقة في السيطرة على آفات وامراض الطماطم (Babalola a,b,c.,2010). واشتملت حاليا عوامل المکافحة ضد مرض الطماطم Trichoderma، وPseudomonas، وانواع من Bacillus. وهي عوامل مکافحة حيوية مهمة جدا في إدارة الآفات والأمراض النباتية (Jacobsen et al., 2004). الأنواع مختلفة من Bacillus وPaenibacillus تساعد على تعزيز صحة المحاصيل والسيطرة على الأمراض بواسطة إنتاج الايضيات کمضادات حيوية لقمع مسببات الأمراض النباتية، والبعض الآخر يکون معادي لمسببات الأمراض النباتية من خلال التنافس على المواد الغذائية مثل الحديد والفوسفات، والبعض منها قد يشکل تأثير غير مباشر من خلال إصلاح النيتروجين والذي يجعله متاح للنباتات الامر الذي يساعد على امتصاصها ويحفزها ويجعلها مقاومة لمسببات الامراض (Gardener, 2004). حاليا تستخدم المکافحة الحيوية على نطاق تجاري حيث توجد العديد من الشرکات التي تنتج هذه الکائنات الدقيقة لکي تستعمل کمبيدات حيوية لمکافحة عدد لا باس به من الکائنات الدقيقة الممرضة للنبات وقد اثبتت فعالية رائعة. لذلک فان عنصر المکافحة البيولوجية يدخل ضمن التصميم الرئيسي عند وضع استراتيجيات مکافحة الأمراض النباتية التي تسببها الميکروبات. ومن ضمن هذه المنتجات الحالية التي تستعمل کعوامل في السيطرة pseudomonad،Bacillus sp التي يتم تسويقها عالميًا کبدائل للمبيدات الکيميائية أو کمکون من مکونات برامج الإدارة المتکاملة للآفات (Schisler et al., 2004). وقد وجد انها تحد بشکل فعال من مرض النبات في الذبول الفيوزاريومي في الطماطم (Manikandan et al., 2010)، والذبول الفيوزاريومي في الموز (Selvaraj et al., 2014)، وفي القطن (Ardakani et al.,2010; Samavat et al., 2014)، ومرض الدراق القذر في الأرز((Prathuangwong et al., 2013 . سلالتان من بکتيريا B. pumilus هما (6-203 و 203-7) وواحدة من B. mycoides (Strain Bac J) کانوا قادرين على الحد من انتشار الفطر Cercospora beticola Sacc الذي يسبب مرض تبقع الأوراق السرکسبوري Cercospora Leaf Spot على بنجر السکر. (Bargabus et al., 2002; Bargabus et al., 2004; Kloepper et al., 2004). وفي دراسة لوحظ إزدياد نمو نبتات الموز نتيجة استعمال B. pumilus ENF24 کعلاجات ضد الذبول الفيوزاريومي للموز الناجم عن الفطرFusarium oxysporum f. sp. Cubense (Figueiredo et al., 2010). وکانت البکتيريا B. cereus فعالة في قمع امراض البرسيم، وتعزيز ظهور الشتلات، کما ادت الى زيادة العقيدات في الفاصوليا الشائعPhaseolus vulgaris (Camacho et al., 2001; Figueiredo et al. 2010). ووجد ان البکتيريا B. Megaterium کان لها تأثير في زيادة مؤشرات النمو في الجذور والتي تشمل الطول ومحتوى المادة الجافة (Kaymak et al., 2008). ويسعى هذا البحث إلى توضيح قدرات المکافحة الحيوية من خلال استخدام البکتيريا العصويةBacillus subtilis ضد ثلاثة انواع من الفطريات التي تصيب الطماطمF. oxysporum f. هيsp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani . مواد البحث وطرائقه تحضير اللقاح تم الحصول على B.subtilis من شرکة International Panaacea Ltd الهندية، وتم تحضير المعلق من خلال اضافة 5 مليجرام من اللقاح الى 95 مل من الماء المقطر المعقم ووضعه على جهاز الدوار المغناطيسي على سرعة 400 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ثم التخفيف الى 107 و تکرار وضع المعلق على نفس الجهاز ينفس السرعة 400 دورة في الدقيقة لنفس المدة. خذت 1 مل من المعلق B. subtilis ووجد ان الترکيز کان يحتوي على 6 × 107 مل/ وحدات تشکيل المستعمرات (8 ×107cfu / ml ) وإستخدم کمقاومة للمسببات المرضية في المختبر. تحضير الفطريات المسببة للأمراض لقد جمعت شتلات الطماطم المصابة بأمراض الذبول من مناطق مختلفة (الفيوش، المناصرة، الهجل، الوهط) في مديرية تبن – محافظة لحج (اليمن). واخذت اولا الجذور المصابة بالذبول الفيوزاريومي وتم تقطيعها الى اجزاء صغير بطول 1-2 سم وتم تطهيرها سطحيا باستخدام الايثانول 70% لمدة دقيقة ثمت غسلها بالماء العادي ثم الماء المقطر ووضعها على بيئة أجار دکستروز البطاطس Potato Dextrose Agar(PDA) حضنت الاطباق على درجة الحرارة 28± 2°م لمدة سبعة ايام للحصول على مستعمرة من الفطرFusarium oxysporum f. sp. lycopersici بعد ذلک تم عملية التنقية من خلال اعادة زراعة هيفا طرفية من المستعمرة. کررت نفس طريقة العزل مع الفطر F.solani والفطر المسبب لمرض ذبول البادرات R.solani(Adebayo and Ekpo., 2005). اختبار تأثير البکتيريا العصوية Bacillus subtilis ضد نمو الفطريات Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani في المختبر نفذت تجارب تقييم فعالية البکتيريا العصوية Bacillus subtilis في المختبر. فقد عقمت أطباق بتري الزجاجية 90 x 20 ملم. وصب البيئات الغذائية أجار دکستروز البطاطس Potato Dextrose Agar(PDA) بمعدل 15 مل بيئة / طبق. وبعد تصلبها وضع قرص من الکائن الممرض بقطر 5 ملم من المستعمرة التي تم تنقيتها (تم اخذها من المستعمرة الفطرية المحضرة من قبل) وضعت في مرکز الطبق. ثم أضيف خمسة مل من المعلق B.subtilis الذي کان يحتوي على 6 × 107 مل/ وحدات تشکيل المستعمرات (8 ×107 (cfu / ml إلى البيئات الغذائية أجار دکستروز البطاطس Potato Dextrose Agar(PDA). اما الشاهد فقد اضيف اليه الماء المقطر بمعدل 5 مل، کررت کل معاملة اربعة مرات لکل نوع من الفطريات (معاملة) واربعة مکررات للشاهد. رقمت الاطباق وکتب عليها تاريخ التحضين واسم الفطر ورقم المکرر وحضنت تحت درجة حرارة 28±2°م. لمدة 5 ايام. (5، 8). قيست اقطار المستعمرات الفطرية، وحسبت النسبة المئوية للتثبيط. النسبة المئوية للتثبيط = ق ش – ق م / ق ش x 100 ((Pandey et al.,1982 ق. ش = قطر الشاهد ق. م = قطر المعالجة
اختبار تأثير البکتيريا العصوية Bacillus subtilis في حماية بذور ونمو بادرات الطماطم من الفطريات Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani في المشتل عقمت التربة في الفرن على درجة حرارة 180 درجة مئوية لمدة 3 ساعات لمدة ثلاثة أيام متتالية ووزعت التربة المعقمة على الأصص بمعدل 500 جم/ أصيص. أجريت العدوى الصناعية عن طريق إضافة المعلق للفطريات الممرضةFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani إلى التربة المعقمة بمعدل 20 مل/ أصيص عوملت بذور الطماطم بالمعلق البکتيري Bacillus subtilis، ماعدا بذور الشاهد. زرعت بذور الطماطم الصنف Lycopersicon esculentum بمعدل 20 بذرة/ أصيص. کررت کل معاملة اربع مرات. حسبت عدد البذور المنبتة، والنسبة المئوية للإنبات، طول الجزء الهوائي، وطول الجذر. % النسبة المئوية للإصابة = ب م / ب. ک x 100 ((Siddiqui et al.,2002 ب. م = البذور المنبتة ب. ک = البذور الکلية التحليل الإحصائي أجريت جميع التحليلات الاحصائية في هذه الدراسة باستخدام برنامج Genstat 5 وأجريت التجارب باستخدام التصميم العشوائي الکامل حيث ان لکل معاملة اربعة مکررات وعرضت البيانات المتحصل عليها لتحليل التباين (ANOVA) ولقد تم اختبار جميع الفروق بين جميع المتوسطات الداخلة في هذه الدراسة من البيانات المتحصل عليها باستخدام اقل الاختلافات المعنوية Least significant difference (LSD). النتائج والمناقشة فعالية البکتيريا Bacillus subtilis في المختبر أظهرت التجارب التي أجريناها فعالية عالية للبکتيريا العصوية Bacillus subtilis المضادة للفطريات الممرضة بشکل ملحوظ وهذا حال دون نمو الفطريات الممرضةFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani ولکن کل بشکل متفاوت. حيث عملت على تثبيط نمو ميسيليوم الفطريات الممرضة والنتائج التي تم الحصول عليها مبينة في الجدول (1). وهذا يتفق مع نتائج کل من (Adebayo and Ekpo, 2005; Ajilogba et al., 2013). ويعود النشاط المثبط للبکتيريا B.subtilis الى ان هذه البکتيريا لديها مجموعة واسعة من مضادات الميکروبات (Grover et al., 2009). کما اشار (Swain and Ray., 2009) الى ان البکتيريا B. subtilis استطاعت تثبيط ميسيليوم الفطر F. oxysporum بنسبة تراوحت بين (25-34%) في المختبر. کما منعت نمو ميسيليوم الفطر R. solanacearum (Almoneafy et al., 2012). واستطاعت سلالتان من بکتيرياB. subtilis هما (FZB24 وFZB37) تثبيط نمو ميسليوم الفطريات F. oxysporum, R. solani, Sclerotinia Sclerotiosum في الدراسة التي اجراها Schmledeknecht et al., 2001 وهذا مماثل تماما للنتيجة في هذا البحث. واوضح عدد من الباحثين الى ان البکتيريا B. subtilis مضادة لمسببات الأمراض التي تنتقل عن طريق التربة وکانت أکثر فعالية في المختبر(Chérif et al., 2002).
جدول (1) فعالية البکتيريا العصوية Bacillus subtilis ضد نمو الفطريات الممرضةFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani في المختبر
الأرقام الموجودة في نفس العمود التي تحمل حروف مختلفة تدل على وجود فروق إحصائية معنوية عند مستوى 5% L.S.D. جدول (2) اختبار تأثير البکتيريا Bacillus subtilis في حماية بذور ونمو نباتات الطماطم من الفطرياتF.oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani في المشتل
الأرقام الموجودة في نفس العمود التي تحمل حروف مختلفة تدل على وجود فروق إحصائية معنوية عند مستوى 5% L.S.D.
اوضحت النتائج ان بکتيريا B. subtilis کان لها تأثير على فطريات الذبول المختلفة مقارنة مع الشاهد فقد تبين ان الفعالية کانت عالية على الفطرين F.solani و Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici وبدرجة اقل على الفطر R.solani من خلال مؤشرات الانبات فقد کانت الاصابة للبذور المعالجة 15% بفطر F.solani وکانت الاصابة للبذور بفطر R.solani 45% بينما وصلت الى 80% في الشاهد. اما بالنسبة للنمو فقد لوحظ ان نمو البادرات التي عولجت بذورها بالبکتيريا B. subtilisوتعرضت للفطر الممرضة F.solaniFusarium, oxysporum f. sp. lycopersici, R.solani کان طول الجزء الهوائي اعلى ب 72.3، 66.4، 17.5% على التوالي مقارنة بالشاهد، واما طول الجذر فقد کان اعلى ب 68.7، 54.5، 11.4%على التوالي مقارنة بالشاهد کما يلاحظ ذلک من خلال الجدول (2). واظهر التحليل الاحصائي وجود فروق معنوية بين المعاملات. وفقا ل (Singh et al., 2008)، فان البذور المعالجة بBN1 B. subtilis کان أنباتها في وقت مبکر. کما وجد ان Bacillus spp معروفة بانها تحد من مؤشر الذبول F. oxysporum وزيادة نمو النبات والنمو السريع لأنسجة نباتات الطماطم من خلال تحفيز المقاومة النظامية ضد الفطر F. oxysporum (Kloepper et al., 2004). وفي بحث اخر خفضت العلاجات المختلفة بالبکتيريا Bacillus spp حدوث المرض وعززت معايير النمو مقارنة بالشاهد في الصوبة. کانت جميعها فعالة في زيادة نمو نباتات الطماطم مما أدى إلى زيادة في الوزن الجاف لکل من الجزء الهوائي و الجذور للبادرات مقارنة مع الشاهد (Gardener, 2004). وفي دراسة اخرى اظهرت المکافحة الحيوية باستخدام البکتيريا Bacillus spp ضد الفطر Colletotrichu acutatum على الفلفل تحسن في نمو الجزء الهوائي وطول الجذور وکذلک زيادة في الکتلة الحيوية الطازجة والمادة الجافة الکلية. کما عملت البکتيريا B. subtilis على تثبيط نمو الفطر C. acutatum بنسبة 60% وادت الى زيادة في وزن ثمار الفلفل في البيوت الزجاجية (Lamsal et al., 2012). وتوصل Schmledeknecht et al., 2001 الى انه تم خفض الإصابة بمرض الذبول الفيوزاريومي الذي يسببه الفطر F. oxysporum بشکل ملحوظ بنسبة وصلت إلى 50 ٪ حيث ادى الى ارتفاع النبات (زيادة طول الجذر والجزء الهوائي) وزيادة الوزن الطازج بشکل ملحوظ مقارنة مع الشاهد في المشتل. ولکن ليس بالضرورة دائما ان تکون النتيجة في المختبر لها نفس التأثير في الصوبة او الحقل بمعنى أن الأنشطة المضادة للفطريات في المختبر لا ترتبط دائما مع الحد من الأمراض في المختبر. کما بينت مجموعة من الاوراق العلمية ان البکتيريا Bacillus spp الموجودة في منطقة محيط الجذور Rhizosphere للنبات کانت فعالة ضد مجموعة متنوعة من مسببات الأمراض التي تنتقل عن طريق التربة. وکانت قادرة على إستخدام آليات متنوعة مضادة لهذه المسببات (Choudhary and Johri., 2009; Kloepper et al., 2009). الاستنتاج يبين هذا البحث أن البکتيريا B. subtilis مهمة جدا وفعالة کعامل مکافحة حيوية. کما لوحظت فعاليتها في قدرتها على تشجيع النمو في النباتات. وهي من الطرق الامنة بيئيا وصحيا. لذلک يجب ان تستمر الابحاث للوصول إلى عوامل المکافحة الميکروبية الفعالة والصديقة للإنسان والکائنات الحية النافعة للبيئة.
المراجع
1. Adebayo O. S., Ekpo E. J. A., (2005) Efficiency of fungal and bacterial biocontrol organisms for the control of fusarium wilt of tomato - NJHS, 9: 63-68. 2. Ajilogba C. F., Babalola O. O., Ahmad. F.,( 2013)- Antagonistic Effects of Bacillus Species in Biocontrol of Tomato Fusarium Wilt- Ethno Med, 7(3): 205-216. 3. Almoneafy. A. A., Xie. G. L., Tian. W. X., Xu. L. H., Zhang. G.Q., Ibrahim. M., (2012) Characterization and evaluation of Bacillus isolates for their potential plant growth and biocontrol activities against tomato bacterial wilt. Afr J Biotechnol, 11: 7193-7201. 4. Ardakani S. S., Heydari A., Khorasani. N., and Arjmandi. R., (2010) Development of new bioformulations of Pseudomonas fluorescens and evaluation of these products against damping-off of cotton seedlings. J. Plant Pathol. 92:83-88. 5. Babalola O. O., (2010a) Improved mycoherbicidal activity of Fusarium arthrosporioides. African Journal of Microbiology Research, 4(15): 1659-1662. 6. Babalola O. O., (2010b) Exogenous cellulase contributes to mycoherbicidal activity of Fusarium arthrosporioides on Orobanche aegyptiaca. International Journal of Agronomy Article ID 963259, 4 pages doi:10.1155/ 2010/963259. 7. Babalola O. O., (2010c) Pectinolytic and cellulolytic enzymes enhance Fusarium compactum virulence on tubercles infection of Egyptian broomrape. International Journal of Microbiology. Article ID 273264, 7 pages doi:10.1155/2010/273264. 8. Babalola O. O., Glick B. R., (2012) Indigenous African agriculture and plant associated microbes: current practice and future transgenic prospects. Sci Res Essays, 7: 2431- 2439. 9. Bargabus R. L., Zidack N. K., Sherwood J. W., Jacobsen B. J., (2002) Characterization of systemic resistance in sugar beet elicited by a non-pathogenic, phyllosphere-colonizing Bacillus mycoides, biological control agent. Physiol Mol Plant Pathol, 61: 289-298. 10. Bargabus R. L., Zidack N. K., Sherwood J. W., Jacobsen B. J., (2004) Screening for the identification of potential biological control agents that induce systemic acquired resistance in sugar beet- Biol Control, 30: 342-350. 11. Burgess L. W., Knight T. E., Tesoriero L., Phan H.T., (2008)- Diagnostic Manual for Plant Diseases in Vietnam. ACIAR. 12. Camacho M., Santamaria C., Temprano F., Daza A., (2001)- Coinoculation with Bacillus sp. CECT 450 improves nodulation in Phaseolus vulgaris L. Can J Microbiol, 47: 1058-1062. 13. Chérif M., Sadû N., Benhamou N., oudabbous A., Boubaker A., Hajlaoui M. R., Tirilly Y., (2002)- Ultrastructure and cytochemistry of in vitro interactions of the antagonistic bacteria Bacillus cereus X16 and Bacillus thuringiensis 55T with Fusarium roseum var. sambucinum- J Plant Pathol, 84: 83–93. 14. Choudhary D. K., Johri. B.N., (2009)- Interactions of Bacillus sp. and plants–With special reference to induced systemic resistance (ISR)- Microbiol Res, 164: 493-513 15. Figueiredo M. V. B., Seldin L., de Araujo F. F., Mariano R. d. L. R., (2010) Plant Growth Promoting Rhizobacteria: Fundamentals and Applications. In: DK Maheshwari (Ed.): Plant Growth and Health Promoting Bacteria- Microbiology Monographs. Berlin Heidelberg:ANTAGONISTIC EFFECTS OF BACILLUS SPECIES IN BIOCONTROL OF TOMATO FUSARIUM WILT 215Springer-Verlag, 18, DOI 10.1007/978-3-642-13612-2_2.control 18 and its antibiotic defective mutants. World J Microbiol Biotechnol, 25: 1329- 1335. 16. Gardener B. B. M., (2004)- Ecology of Bacillus and Paenibacillus sp in agricultural systems. Phytopathol, 94: 1252-1258. 17. Grover M., Nain L., Saxena A. K., (2009)- Comparison between Bacillus subtilis RP24 agents in integrated pest management systems: Plant diseases. In: Symposium- The nature and application of biocontrol microbes: Bacillus sp. Phytopathol, 94: 1272-1275. 18. Jacobsen B. J., Zidack N. K., Larson B. J., (2004)- The role of Bacillus-based biological control agents in integrated pest management systems: Plant diseases. In: Symposium- The nature and application of biocontrol microbes: Bacillus sp. Phytopathol, 94: 1272-1275. 19. Jones D. R., (2000)- History of banana breeding. In: D Jones (Ed.): Diseases of Banana, Abaca And Enset. Wallingford, UK: CAB International, pp. 425-449. 20. Kaymak H. C., Yarali F., Guvenc I., Donmez M. F., (2008)- The effect of inoculation with plant growth Rhizobacteria (PGPR) on root formation of mint (Mentha piperita L) Cuttings. Afr J Biotechnol, 7: 4479-4483. 21. Khan M. R., Khan S. M., (2002)- Effects of root-dip treatment with certain phosphate solubilizing microorganisms on the fusarial wilt of tomato Bioresource Technol, 85: 213-215. 22. Kloepper J. W., Ryu C. M., Zhang S., (2009)- Induced Systemic Resistance and Promotion of Plant Growth by Bacillus spp. Phytopathol, 94: 1259-1266. 23. Lamsal K., Kim S. W., Kim Y. S., Lee Y. S., (2012)- Application of rhizobacteria for plant growth promotion effect and biocontrol of Anthracnose caused by Colletotrichum acutatum on pepper. Mycobiol, 40: 244–251. 24. Manikandan R., Saravanakumar D., Rajendran L., Raguchander T., Samiyappan R., (2010)- Standardization of liquid formulation of Pseudomonas fluorescens Pf1 for its efficacy against Fusarium wilt of tomato. Biol. Control, 54:83-89. 25. Pandey D. K., Tripathi N. N., Tripathi R. O., Dixit S. N., (1982) - Fungitoxic and Phytotoxic properties of essential oil of Phylis sauvolensis- Pfkrankh. Pfschutz. 89: 344-346. 26. Prathuangwong. S., Athinuwat D., Chuaboon W., Chatnaparat T., Buensanteai N., (2013)- Bioformulation Pseudomonas fluorescens SP007s against dirty panicle disease of rice. Afr. J. Microbiol. Res. 7:5274-5283. 27. Samavat. S., Heydari A., Zamanizadeh H. R., Rezaee S., Aliabadi A. A., (2014)- Application of new bioformulations of Pseudomonas aureofaciens for biocontrol of cotton seedling damping-off- J. Plant Prot. Res. 54:334-339. 28. Schisler. D. A., Slininger P. J., Behle R. W., Jackson M. A., (2004)- Formulation of Bacillus spp. for biological control of plant diseases- Phytopathology 94:1267-1271. 29. Schmledeknecht. G., Issoufou. I., H. junge., Bochow H., (2001)- Use of Bacillus subtilis as biocontrol agent V biological control of diseases on maize and Sunflowers- J Plant Dis Protect, 108: 500-512. 30. Selvaraj. S., Ganeshamoorthi P., Anand T., Raguchander T., Seenivasan N., Samiyappan R., (2014)- Evaluation of a liquid formulation of Pseudomonas fluorescens against Fusarium oxysporum f. sp cubense and Helicotylenchus multicinctus in banana plantation- BioControl 59:345-355. 31. Siddiqui, Z. A., and Mahmood I., (2002)- Biological control of Meloidogyne incognita race 3 and Macrophomina phaseolina by Paecilomyces lilacinus and Bacillus subtilis alone and in combination in chickpea. Fund. Appl. Nematol., 16: 215– 218 32. Singh. N., Pandey P., Dubey R.C., Maheshwar D. K., (2008)- Biological control of root rot fungus Macrophomina phaseolina and growth enhancement of Pinus roxburghii (Sarg.) by rhizosphere competent Bacillus subtilis BN1- World J Microbiol Biotechnol, 24:1669-1679. 33. Swain M. R., Ray R. C., (2009)- Biocontrol and other beneficial activities of Bacillus subtilis isolated from cowdung microflora. Microbiol Res, 164: 121-130. 34. Thangavelu. R., Palaniswani A., Velazhahan R., (2004)- Mass production of Trichoderma harzianum for managing Fusarium wilt of banana. Agric Ecosyst Environ, 103: 259-263.
Effectiveness of biological control by Bacillus subtilis against the plant pathogenic fungi Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani in Vitro and Nursery Mohammed Ali Mohammed Al-Sunaidi Department of Biology-Faculty of Education/Saber-University of Aden m_alsunaidi@yahoo.com ABSTRACT:The study was carried out in the Laboratory and Nursery of Biology Department at the University of Aden - Yemen during October - December 2017. Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F. solani, Rizhoctonia solani. The organisms that cause fusarium disease for tomatoes Lycopersicon esculentum Mill. Bacillus subtilis has been tested as a vital control agent for its effectiveness against these fungi in vitro through inhibition of mycelial growth. Result of laboratory experiments showed that it was effective against the fungus F. solani followed by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici followed by Rizhoctonia solani with an inhibition ratio of 94.95%, 92.00% and 77.14%, respectively, and significant differences were found at (p = 0.05) compared to the control. When tested for germination of tomato seeds treated with these bacteria in the greenhouse, it was found that the highest percentage of germination of seeds that fell prey to F. solani had reached 85% followed by the seeds that were exposed to the fungus Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (75%), Rizhoctonia solani (55%), and untreated seeds (20%). The growth parameters (length of the air segment and length of the roots) showed the treatment of B. subtilis bacteria against high fungus fungi and found significant statistical differences at 0.05% between the different transactions with each other and the different treatments on one hand and the other side and the highest impact against F. solani, where the length of the green portion and length of the roots reached 1.45 ± 38.50 mm and 51.5 ± 30.45 mm respectively compared to 1.65 ± 22.35 mm and 1.45 ± 18.35 mm respectively. This result showed that B. subtilis bacteria are vital agents that should be harnessed for more biological control applications. Keywords: Bacillus subtilis, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rizhoctonia solani, Biological control, Tomato | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Keywords | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| الکلمات المفتاحية: Bacillus subtilis; المکافحة الحيوية، الطماطم. Keywords: Bacillus subtilis; Fusarium oxysporum; Fusarium solani; Rizhoctonia solani; Biological control; Tomato | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Supplementary Files
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Full Text | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
فعالية المکافحة الحيوية للبکتيريا Bacillus subtilis ضد الفطريات Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani في المختبر والمشتل محمد علي محمد السنيديقسم الاحياء - کلية التربية/ صبر - جامعة عدن m_alsunaidi@yahoo.com الملخص العربي : نفذت الدراسة في مختبر وصوبة قسم علو الحياة في جامعة عدن - اليمن في الفترة من اکتوبر الى ديسمبر 2017م. حيث تعتبر الفطرياتFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani من الکائنات المسببة لمرض الذبول الفيوزاريومي للطماطم Lycopersicon esculentum Mill. وقد تم اختبار بکتيرياBacillus subtilis کعامل مکافحة حيوية لمعرفة فعاليتها ضد هذه الفطريات في المختبر من خلال منطقة التثبيط والقدرة على التثبيط کنسبة مئوية. وأظهرت نتيجة التحليل المختبري انها کانت فعالة ضد الفطر F. solani يليه الفطر Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici ثم الفطر Rizhoctonia solani بنسبة تثبيط وصلت الى 94.95، 92.00، 77.14% على التوالي ووجدت فروق معنوية عالية عند (p=0.05) مقارنة بالشاهد. وعند اختبار انبات بذور الطماطم المعالجة بهذه البکتيريا في الصوبة وجد أن النسبة المئوية الاعلى لإنبات البذور التي تعرضت للفطر F. solani قد وصلت إلى 85% تليها البذور التي تعرضت للفطر Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici حيث وصلت إلى 75% ثم البذور التي تعرضت للفطر Rizhoctonia solani (55%) بينما لم تتجاوز البذور المنبتة في الشاهد 20%. اما مؤشرات النمو (طول الجزء الهوائي، وطول الجذور) فقد اظهرت المعالجات بالبکتيريا B. subtilis ضد فطريات الذبول فعالية عالية ووجدت فروق احصائية معنوية جدا عند 0.05% بين المعاملات المختلفة مع بعضها وبين المعاملات المختلفة من جهة والشاهد من الجهة الاخرى وکان التأثير الاعلى ضد الفطر F. solani حيث وصل طول الجزء الخضري وطول الجذور الى (1.45±38.50 ملم) و(51.5±30.45 ملم) على التوالي مقارنة بالشاهد الذي کان (1.65±22.35 ملم) و(1.45±18.35 ملم) على التوالي. هذه النتيجة أوضحت أن البکتيرياB. subtilis هي عوامل فعالة ينبغي تسخيرها لمزيد من تطبيقات المکافحة الحيوية. الکلمات المفتاحية: Bacillus subtilis, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rizhoctonia solani, المکافحة الحيوية، الطماطم.
المقدمة يوجد عدد کبير من مسببات الأمراض التي تنقلها التربة وتصيب الکثير من المحاصيل وتسبب لها أضرارا کبيرة (Babalola and Glick, 2012). ومن أهمها الذبول الفيوزاريومي. الذي يعتبر مرضًأ مدمرًا لنباتات الطماطم ويتسبب في الکثير من الخسائر للمزارعين في جميع أنحاء العالم. تبدأ الأعراض کاصفرار تدريجي والذبول للأوراق السفلية (Khan and Khan, 2002) وينجم ذلک عن نمو الکونيديات الصغيرة Microconidia في الخلايا الداخلية للخشب في الجذر والساق وبالتالي فشل الخشب المصاب في توصيل المتطلبات من الماء الى النبات وفي الآخر موت النبات يکون امر لا مفر منه (Burgess et al., 2008). ويتم تحرر الأبواغ الکونيدية Conidia في الأنسجة المحيطة عندما يموت النبات. وهذه الابواغ تشکل في وقت لاحق الابواغ الکلاميدوية Chlamydospores التي تنتقل الى التربة (Jones, 2000). ويمکن أن تبقى هذه الابواغ في التربة لمدة تصل إلى 30 سنة حتى تتوفر ظروف مواتية وتنتشر مرة اخرى وتصيب نباتات جديدة (Thangavelu et al.,2004 ). يتم اليوم استخدام العديد من الکائنات الحية الدقيقة في السيطرة على آفات وامراض الطماطم (Babalola a,b,c.,2010). واشتملت حاليا عوامل المکافحة ضد مرض الطماطم Trichoderma، وPseudomonas، وانواع من Bacillus. وهي عوامل مکافحة حيوية مهمة جدا في إدارة الآفات والأمراض النباتية (Jacobsen et al., 2004). الأنواع مختلفة من Bacillus وPaenibacillus تساعد على تعزيز صحة المحاصيل والسيطرة على الأمراض بواسطة إنتاج الايضيات کمضادات حيوية لقمع مسببات الأمراض النباتية، والبعض الآخر يکون معادي لمسببات الأمراض النباتية من خلال التنافس على المواد الغذائية مثل الحديد والفوسفات، والبعض منها قد يشکل تأثير غير مباشر من خلال إصلاح النيتروجين والذي يجعله متاح للنباتات الامر الذي يساعد على امتصاصها ويحفزها ويجعلها مقاومة لمسببات الامراض (Gardener, 2004). حاليا تستخدم المکافحة الحيوية على نطاق تجاري حيث توجد العديد من الشرکات التي تنتج هذه الکائنات الدقيقة لکي تستعمل کمبيدات حيوية لمکافحة عدد لا باس به من الکائنات الدقيقة الممرضة للنبات وقد اثبتت فعالية رائعة. لذلک فان عنصر المکافحة البيولوجية يدخل ضمن التصميم الرئيسي عند وضع استراتيجيات مکافحة الأمراض النباتية التي تسببها الميکروبات. ومن ضمن هذه المنتجات الحالية التي تستعمل کعوامل في السيطرة pseudomonad،Bacillus sp التي يتم تسويقها عالميًا کبدائل للمبيدات الکيميائية أو کمکون من مکونات برامج الإدارة المتکاملة للآفات (Schisler et al., 2004). وقد وجد انها تحد بشکل فعال من مرض النبات في الذبول الفيوزاريومي في الطماطم (Manikandan et al., 2010)، والذبول الفيوزاريومي في الموز (Selvaraj et al., 2014)، وفي القطن (Ardakani et al.,2010; Samavat et al., 2014)، ومرض الدراق القذر في الأرز((Prathuangwong et al., 2013 . سلالتان من بکتيريا B. pumilus هما (6-203 و 203-7) وواحدة من B. mycoides (Strain Bac J) کانوا قادرين على الحد من انتشار الفطر Cercospora beticola Sacc الذي يسبب مرض تبقع الأوراق السرکسبوري Cercospora Leaf Spot على بنجر السکر. (Bargabus et al., 2002; Bargabus et al., 2004; Kloepper et al., 2004). وفي دراسة لوحظ إزدياد نمو نبتات الموز نتيجة استعمال B. pumilus ENF24 کعلاجات ضد الذبول الفيوزاريومي للموز الناجم عن الفطرFusarium oxysporum f. sp. Cubense (Figueiredo et al., 2010). وکانت البکتيريا B. cereus فعالة في قمع امراض البرسيم، وتعزيز ظهور الشتلات، کما ادت الى زيادة العقيدات في الفاصوليا الشائعPhaseolus vulgaris (Camacho et al., 2001; Figueiredo et al. 2010). ووجد ان البکتيريا B. Megaterium کان لها تأثير في زيادة مؤشرات النمو في الجذور والتي تشمل الطول ومحتوى المادة الجافة (Kaymak et al., 2008). ويسعى هذا البحث إلى توضيح قدرات المکافحة الحيوية من خلال استخدام البکتيريا العصويةBacillus subtilis ضد ثلاثة انواع من الفطريات التي تصيب الطماطمF. oxysporum f. هيsp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani . مواد البحث وطرائقه تحضير اللقاح تم الحصول على B.subtilis من شرکة International Panaacea Ltd الهندية، وتم تحضير المعلق من خلال اضافة 5 مليجرام من اللقاح الى 95 مل من الماء المقطر المعقم ووضعه على جهاز الدوار المغناطيسي على سرعة 400 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ثم التخفيف الى 107 و تکرار وضع المعلق على نفس الجهاز ينفس السرعة 400 دورة في الدقيقة لنفس المدة. خذت 1 مل من المعلق B. subtilis ووجد ان الترکيز کان يحتوي على 6 × 107 مل/ وحدات تشکيل المستعمرات (8 ×107cfu / ml ) وإستخدم کمقاومة للمسببات المرضية في المختبر. تحضير الفطريات المسببة للأمراض لقد جمعت شتلات الطماطم المصابة بأمراض الذبول من مناطق مختلفة (الفيوش، المناصرة، الهجل، الوهط) في مديرية تبن – محافظة لحج (اليمن). واخذت اولا الجذور المصابة بالذبول الفيوزاريومي وتم تقطيعها الى اجزاء صغير بطول 1-2 سم وتم تطهيرها سطحيا باستخدام الايثانول 70% لمدة دقيقة ثمت غسلها بالماء العادي ثم الماء المقطر ووضعها على بيئة أجار دکستروز البطاطس Potato Dextrose Agar(PDA) حضنت الاطباق على درجة الحرارة 28± 2°م لمدة سبعة ايام للحصول على مستعمرة من الفطرFusarium oxysporum f. sp. lycopersici بعد ذلک تم عملية التنقية من خلال اعادة زراعة هيفا طرفية من المستعمرة. کررت نفس طريقة العزل مع الفطر F.solani والفطر المسبب لمرض ذبول البادرات R.solani(Adebayo and Ekpo., 2005). اختبار تأثير البکتيريا العصوية Bacillus subtilis ضد نمو الفطريات Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani في المختبر نفذت تجارب تقييم فعالية البکتيريا العصوية Bacillus subtilis في المختبر. فقد عقمت أطباق بتري الزجاجية 90 x 20 ملم. وصب البيئات الغذائية أجار دکستروز البطاطس Potato Dextrose Agar(PDA) بمعدل 15 مل بيئة / طبق. وبعد تصلبها وضع قرص من الکائن الممرض بقطر 5 ملم من المستعمرة التي تم تنقيتها (تم اخذها من المستعمرة الفطرية المحضرة من قبل) وضعت في مرکز الطبق. ثم أضيف خمسة مل من المعلق B.subtilis الذي کان يحتوي على 6 × 107 مل/ وحدات تشکيل المستعمرات (8 ×107 (cfu / ml إلى البيئات الغذائية أجار دکستروز البطاطس Potato Dextrose Agar(PDA). اما الشاهد فقد اضيف اليه الماء المقطر بمعدل 5 مل، کررت کل معاملة اربعة مرات لکل نوع من الفطريات (معاملة) واربعة مکررات للشاهد. رقمت الاطباق وکتب عليها تاريخ التحضين واسم الفطر ورقم المکرر وحضنت تحت درجة حرارة 28±2°م. لمدة 5 ايام. (5، 8). قيست اقطار المستعمرات الفطرية، وحسبت النسبة المئوية للتثبيط. النسبة المئوية للتثبيط = ق ش – ق م / ق ش x 100 ((Pandey et al.,1982 ق. ش = قطر الشاهد ق. م = قطر المعالجة
اختبار تأثير البکتيريا العصوية Bacillus subtilis في حماية بذور ونمو بادرات الطماطم من الفطريات Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani في المشتل عقمت التربة في الفرن على درجة حرارة 180 درجة مئوية لمدة 3 ساعات لمدة ثلاثة أيام متتالية ووزعت التربة المعقمة على الأصص بمعدل 500 جم/ أصيص. أجريت العدوى الصناعية عن طريق إضافة المعلق للفطريات الممرضةFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani إلى التربة المعقمة بمعدل 20 مل/ أصيص عوملت بذور الطماطم بالمعلق البکتيري Bacillus subtilis، ماعدا بذور الشاهد. زرعت بذور الطماطم الصنف Lycopersicon esculentum بمعدل 20 بذرة/ أصيص. کررت کل معاملة اربع مرات. حسبت عدد البذور المنبتة، والنسبة المئوية للإنبات، طول الجزء الهوائي، وطول الجذر. % النسبة المئوية للإصابة = ب م / ب. ک x 100 ((Siddiqui et al.,2002 ب. م = البذور المنبتة ب. ک = البذور الکلية التحليل الإحصائي أجريت جميع التحليلات الاحصائية في هذه الدراسة باستخدام برنامج Genstat 5 وأجريت التجارب باستخدام التصميم العشوائي الکامل حيث ان لکل معاملة اربعة مکررات وعرضت البيانات المتحصل عليها لتحليل التباين (ANOVA) ولقد تم اختبار جميع الفروق بين جميع المتوسطات الداخلة في هذه الدراسة من البيانات المتحصل عليها باستخدام اقل الاختلافات المعنوية Least significant difference (LSD). النتائج والمناقشة فعالية البکتيريا Bacillus subtilis في المختبر أظهرت التجارب التي أجريناها فعالية عالية للبکتيريا العصوية Bacillus subtilis المضادة للفطريات الممرضة بشکل ملحوظ وهذا حال دون نمو الفطريات الممرضةFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani ولکن کل بشکل متفاوت. حيث عملت على تثبيط نمو ميسيليوم الفطريات الممرضة والنتائج التي تم الحصول عليها مبينة في الجدول (1). وهذا يتفق مع نتائج کل من (Adebayo and Ekpo, 2005; Ajilogba et al., 2013). ويعود النشاط المثبط للبکتيريا B.subtilis الى ان هذه البکتيريا لديها مجموعة واسعة من مضادات الميکروبات (Grover et al., 2009). کما اشار (Swain and Ray., 2009) الى ان البکتيريا B. subtilis استطاعت تثبيط ميسيليوم الفطر F. oxysporum بنسبة تراوحت بين (25-34%) في المختبر. کما منعت نمو ميسيليوم الفطر R. solanacearum (Almoneafy et al., 2012). واستطاعت سلالتان من بکتيرياB. subtilis هما (FZB24 وFZB37) تثبيط نمو ميسليوم الفطريات F. oxysporum, R. solani, Sclerotinia Sclerotiosum في الدراسة التي اجراها Schmledeknecht et al., 2001 وهذا مماثل تماما للنتيجة في هذا البحث. واوضح عدد من الباحثين الى ان البکتيريا B. subtilis مضادة لمسببات الأمراض التي تنتقل عن طريق التربة وکانت أکثر فعالية في المختبر(Chérif et al., 2002).
جدول (1) فعالية البکتيريا العصوية Bacillus subtilis ضد نمو الفطريات الممرضةFusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani في المختبر
الأرقام الموجودة في نفس العمود التي تحمل حروف مختلفة تدل على وجود فروق إحصائية معنوية عند مستوى 5% L.S.D. جدول (2) اختبار تأثير البکتيريا Bacillus subtilis في حماية بذور ونمو نباتات الطماطم من الفطرياتF.oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, R.solani في المشتل
الأرقام الموجودة في نفس العمود التي تحمل حروف مختلفة تدل على وجود فروق إحصائية معنوية عند مستوى 5% L.S.D.
اوضحت النتائج ان بکتيريا B. subtilis کان لها تأثير على فطريات الذبول المختلفة مقارنة مع الشاهد فقد تبين ان الفعالية کانت عالية على الفطرين F.solani و Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici وبدرجة اقل على الفطر R.solani من خلال مؤشرات الانبات فقد کانت الاصابة للبذور المعالجة 15% بفطر F.solani وکانت الاصابة للبذور بفطر R.solani 45% بينما وصلت الى 80% في الشاهد. اما بالنسبة للنمو فقد لوحظ ان نمو البادرات التي عولجت بذورها بالبکتيريا B. subtilisوتعرضت للفطر الممرضة F.solaniFusarium, oxysporum f. sp. lycopersici, R.solani کان طول الجزء الهوائي اعلى ب 72.3، 66.4، 17.5% على التوالي مقارنة بالشاهد، واما طول الجذر فقد کان اعلى ب 68.7، 54.5، 11.4%على التوالي مقارنة بالشاهد کما يلاحظ ذلک من خلال الجدول (2). واظهر التحليل الاحصائي وجود فروق معنوية بين المعاملات. وفقا ل (Singh et al., 2008)، فان البذور المعالجة بBN1 B. subtilis کان أنباتها في وقت مبکر. کما وجد ان Bacillus spp معروفة بانها تحد من مؤشر الذبول F. oxysporum وزيادة نمو النبات والنمو السريع لأنسجة نباتات الطماطم من خلال تحفيز المقاومة النظامية ضد الفطر F. oxysporum (Kloepper et al., 2004). وفي بحث اخر خفضت العلاجات المختلفة بالبکتيريا Bacillus spp حدوث المرض وعززت معايير النمو مقارنة بالشاهد في الصوبة. کانت جميعها فعالة في زيادة نمو نباتات الطماطم مما أدى إلى زيادة في الوزن الجاف لکل من الجزء الهوائي و الجذور للبادرات مقارنة مع الشاهد (Gardener, 2004). وفي دراسة اخرى اظهرت المکافحة الحيوية باستخدام البکتيريا Bacillus spp ضد الفطر Colletotrichu acutatum على الفلفل تحسن في نمو الجزء الهوائي وطول الجذور وکذلک زيادة في الکتلة الحيوية الطازجة والمادة الجافة الکلية. کما عملت البکتيريا B. subtilis على تثبيط نمو الفطر C. acutatum بنسبة 60% وادت الى زيادة في وزن ثمار الفلفل في البيوت الزجاجية (Lamsal et al., 2012). وتوصل Schmledeknecht et al., 2001 الى انه تم خفض الإصابة بمرض الذبول الفيوزاريومي الذي يسببه الفطر F. oxysporum بشکل ملحوظ بنسبة وصلت إلى 50 ٪ حيث ادى الى ارتفاع النبات (زيادة طول الجذر والجزء الهوائي) وزيادة الوزن الطازج بشکل ملحوظ مقارنة مع الشاهد في المشتل. ولکن ليس بالضرورة دائما ان تکون النتيجة في المختبر لها نفس التأثير في الصوبة او الحقل بمعنى أن الأنشطة المضادة للفطريات في المختبر لا ترتبط دائما مع الحد من الأمراض في المختبر. کما بينت مجموعة من الاوراق العلمية ان البکتيريا Bacillus spp الموجودة في منطقة محيط الجذور Rhizosphere للنبات کانت فعالة ضد مجموعة متنوعة من مسببات الأمراض التي تنتقل عن طريق التربة. وکانت قادرة على إستخدام آليات متنوعة مضادة لهذه المسببات (Choudhary and Johri., 2009; Kloepper et al., 2009). الاستنتاج يبين هذا البحث أن البکتيريا B. subtilis مهمة جدا وفعالة کعامل مکافحة حيوية. کما لوحظت فعاليتها في قدرتها على تشجيع النمو في النباتات. وهي من الطرق الامنة بيئيا وصحيا. لذلک يجب ان تستمر الابحاث للوصول إلى عوامل المکافحة الميکروبية الفعالة والصديقة للإنسان والکائنات الحية النافعة للبيئة.
المراجع
1. Adebayo O. S., Ekpo E. J. A., (2005) Efficiency of fungal and bacterial biocontrol organisms for the control of fusarium wilt of tomato - NJHS, 9: 63-68. 2. Ajilogba C. F., Babalola O. O., Ahmad. F.,( 2013)- Antagonistic Effects of Bacillus Species in Biocontrol of Tomato Fusarium Wilt- Ethno Med, 7(3): 205-216. 3. Almoneafy. A. A., Xie. G. L., Tian. W. X., Xu. L. H., Zhang. G.Q., Ibrahim. M., (2012) Characterization and evaluation of Bacillus isolates for their potential plant growth and biocontrol activities against tomato bacterial wilt. Afr J Biotechnol, 11: 7193-7201. 4. Ardakani S. S., Heydari A., Khorasani. N., and Arjmandi. R., (2010) Development of new bioformulations of Pseudomonas fluorescens and evaluation of these products against damping-off of cotton seedlings. J. Plant Pathol. 92:83-88. 5. Babalola O. O., (2010a) Improved mycoherbicidal activity of Fusarium arthrosporioides. African Journal of Microbiology Research, 4(15): 1659-1662. 6. Babalola O. O., (2010b) Exogenous cellulase contributes to mycoherbicidal activity of Fusarium arthrosporioides on Orobanche aegyptiaca. International Journal of Agronomy Article ID 963259, 4 pages doi:10.1155/ 2010/963259. 7. Babalola O. O., (2010c) Pectinolytic and cellulolytic enzymes enhance Fusarium compactum virulence on tubercles infection of Egyptian broomrape. International Journal of Microbiology. Article ID 273264, 7 pages doi:10.1155/2010/273264. 8. Babalola O. O., Glick B. R., (2012) Indigenous African agriculture and plant associated microbes: current practice and future transgenic prospects. Sci Res Essays, 7: 2431- 2439. 9. Bargabus R. L., Zidack N. K., Sherwood J. W., Jacobsen B. J., (2002) Characterization of systemic resistance in sugar beet elicited by a non-pathogenic, phyllosphere-colonizing Bacillus mycoides, biological control agent. Physiol Mol Plant Pathol, 61: 289-298. 10. Bargabus R. L., Zidack N. K., Sherwood J. W., Jacobsen B. J., (2004) Screening for the identification of potential biological control agents that induce systemic acquired resistance in sugar beet- Biol Control, 30: 342-350. 11. Burgess L. W., Knight T. E., Tesoriero L., Phan H.T., (2008)- Diagnostic Manual for Plant Diseases in Vietnam. ACIAR. 12. Camacho M., Santamaria C., Temprano F., Daza A., (2001)- Coinoculation with Bacillus sp. CECT 450 improves nodulation in Phaseolus vulgaris L. Can J Microbiol, 47: 1058-1062. 13. Chérif M., Sadû N., Benhamou N., oudabbous A., Boubaker A., Hajlaoui M. R., Tirilly Y., (2002)- Ultrastructure and cytochemistry of in vitro interactions of the antagonistic bacteria Bacillus cereus X16 and Bacillus thuringiensis 55T with Fusarium roseum var. sambucinum- J Plant Pathol, 84: 83–93. 14. Choudhary D. K., Johri. B.N., (2009)- Interactions of Bacillus sp. and plants–With special reference to induced systemic resistance (ISR)- Microbiol Res, 164: 493-513 15. Figueiredo M. V. B., Seldin L., de Araujo F. F., Mariano R. d. L. R., (2010) Plant Growth Promoting Rhizobacteria: Fundamentals and Applications. In: DK Maheshwari (Ed.): Plant Growth and Health Promoting Bacteria- Microbiology Monographs. Berlin Heidelberg:ANTAGONISTIC EFFECTS OF BACILLUS SPECIES IN BIOCONTROL OF TOMATO FUSARIUM WILT 215Springer-Verlag, 18, DOI 10.1007/978-3-642-13612-2_2.control 18 and its antibiotic defective mutants. World J Microbiol Biotechnol, 25: 1329- 1335. 16. Gardener B. B. M., (2004)- Ecology of Bacillus and Paenibacillus sp in agricultural systems. Phytopathol, 94: 1252-1258. 17. Grover M., Nain L., Saxena A. K., (2009)- Comparison between Bacillus subtilis RP24 agents in integrated pest management systems: Plant diseases. In: Symposium- The nature and application of biocontrol microbes: Bacillus sp. Phytopathol, 94: 1272-1275. 18. Jacobsen B. J., Zidack N. K., Larson B. J., (2004)- The role of Bacillus-based biological control agents in integrated pest management systems: Plant diseases. In: Symposium- The nature and application of biocontrol microbes: Bacillus sp. Phytopathol, 94: 1272-1275. 19. Jones D. R., (2000)- History of banana breeding. In: D Jones (Ed.): Diseases of Banana, Abaca And Enset. Wallingford, UK: CAB International, pp. 425-449. 20. Kaymak H. C., Yarali F., Guvenc I., Donmez M. F., (2008)- The effect of inoculation with plant growth Rhizobacteria (PGPR) on root formation of mint (Mentha piperita L) Cuttings. Afr J Biotechnol, 7: 4479-4483. 21. Khan M. R., Khan S. M., (2002)- Effects of root-dip treatment with certain phosphate solubilizing microorganisms on the fusarial wilt of tomato Bioresource Technol, 85: 213-215. 22. Kloepper J. W., Ryu C. M., Zhang S., (2009)- Induced Systemic Resistance and Promotion of Plant Growth by Bacillus spp. Phytopathol, 94: 1259-1266. 23. Lamsal K., Kim S. W., Kim Y. S., Lee Y. S., (2012)- Application of rhizobacteria for plant growth promotion effect and biocontrol of Anthracnose caused by Colletotrichum acutatum on pepper. Mycobiol, 40: 244–251. 24. Manikandan R., Saravanakumar D., Rajendran L., Raguchander T., Samiyappan R., (2010)- Standardization of liquid formulation of Pseudomonas fluorescens Pf1 for its efficacy against Fusarium wilt of tomato. Biol. Control, 54:83-89. 25. Pandey D. K., Tripathi N. N., Tripathi R. O., Dixit S. N., (1982) - Fungitoxic and Phytotoxic properties of essential oil of Phylis sauvolensis- Pfkrankh. Pfschutz. 89: 344-346. 26. Prathuangwong. S., Athinuwat D., Chuaboon W., Chatnaparat T., Buensanteai N., (2013)- Bioformulation Pseudomonas fluorescens SP007s against dirty panicle disease of rice. Afr. J. Microbiol. Res. 7:5274-5283. 27. Samavat. S., Heydari A., Zamanizadeh H. R., Rezaee S., Aliabadi A. A., (2014)- Application of new bioformulations of Pseudomonas aureofaciens for biocontrol of cotton seedling damping-off- J. Plant Prot. Res. 54:334-339. 28. Schisler. D. A., Slininger P. J., Behle R. W., Jackson M. A., (2004)- Formulation of Bacillus spp. for biological control of plant diseases- Phytopathology 94:1267-1271. 29. Schmledeknecht. G., Issoufou. I., H. junge., Bochow H., (2001)- Use of Bacillus subtilis as biocontrol agent V biological control of diseases on maize and Sunflowers- J Plant Dis Protect, 108: 500-512. 30. Selvaraj. S., Ganeshamoorthi P., Anand T., Raguchander T., Seenivasan N., Samiyappan R., (2014)- Evaluation of a liquid formulation of Pseudomonas fluorescens against Fusarium oxysporum f. sp cubense and Helicotylenchus multicinctus in banana plantation- BioControl 59:345-355. 31. Siddiqui, Z. A., and Mahmood I., (2002)- Biological control of Meloidogyne incognita race 3 and Macrophomina phaseolina by Paecilomyces lilacinus and Bacillus subtilis alone and in combination in chickpea. Fund. Appl. Nematol., 16: 215– 218 32. Singh. N., Pandey P., Dubey R.C., Maheshwar D. K., (2008)- Biological control of root rot fungus Macrophomina phaseolina and growth enhancement of Pinus roxburghii (Sarg.) by rhizosphere competent Bacillus subtilis BN1- World J Microbiol Biotechnol, 24:1669-1679. 33. Swain M. R., Ray R. C., (2009)- Biocontrol and other beneficial activities of Bacillus subtilis isolated from cowdung microflora. Microbiol Res, 164: 121-130. 34. Thangavelu. R., Palaniswani A., Velazhahan R., (2004)- Mass production of Trichoderma harzianum for managing Fusarium wilt of banana. Agric Ecosyst Environ, 103: 259-263.
Effectiveness of biological control by Bacillus subtilis against the plant pathogenic fungi Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F.solani, Rizhoctonia solani in Vitro and Nursery Mohammed Ali Mohammed Al-Sunaidi Department of Biology-Faculty of Education/Saber-University of Aden m_alsunaidi@yahoo.com ABSTRACT:The study was carried out in the Laboratory and Nursery of Biology Department at the University of Aden - Yemen during October - December 2017. Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, F. solani, Rizhoctonia solani. The organisms that cause fusarium disease for tomatoes Lycopersicon esculentum Mill. Bacillus subtilis has been tested as a vital control agent for its effectiveness against these fungi in vitro through inhibition of mycelial growth. Result of laboratory experiments showed that it was effective against the fungus F. solani followed by Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici followed by Rizhoctonia solani with an inhibition ratio of 94.95%, 92.00% and 77.14%, respectively, and significant differences were found at (p = 0.05) compared to the control. When tested for germination of tomato seeds treated with these bacteria in the greenhouse, it was found that the highest percentage of germination of seeds that fell prey to F. solani had reached 85% followed by the seeds that were exposed to the fungus Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici (75%), Rizhoctonia solani (55%), and untreated seeds (20%). The growth parameters (length of the air segment and length of the roots) showed the treatment of B. subtilis bacteria against high fungus fungi and found significant statistical differences at 0.05% between the different transactions with each other and the different treatments on one hand and the other side and the highest impact against F. solani, where the length of the green portion and length of the roots reached 1.45 ± 38.50 mm and 51.5 ± 30.45 mm respectively compared to 1.65 ± 22.35 mm and 1.45 ± 18.35 mm respectively. This result showed that B. subtilis bacteria are vital agents that should be harnessed for more biological control applications. Keywords: Bacillus subtilis, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rizhoctonia solani, Biological control, Tomato | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
1. Adebayo O. S., Ekpo E. J. A., (2005) Efficiency of fungal and bacterial biocontrol organisms for the control of fusarium wilt of tomato - NJHS, 9: 63-68.
2. Ajilogba C. F., Babalola O. O., Ahmad. F.,( 2013)- Antagonistic Effects of Bacillus Species in Biocontrol of Tomato Fusarium Wilt- Ethno Med, 7(3): 205-216.
3. Almoneafy. A. A., Xie. G. L., Tian. W. X., Xu. L. H., Zhang. G.Q., Ibrahim. M., (2012) Characterization and evaluation of Bacillus isolates for their potential plant growth and biocontrol activities against tomato bacterial wilt. Afr J Biotechnol, 11: 7193-7201.
4. Ardakani S. S., Heydari A., Khorasani. N., and Arjmandi. R., (2010) Development of new bioformulations of Pseudomonas fluorescens and evaluation of these products against damping-off of cotton seedlings. J. Plant Pathol. 92:83-88.
5. Babalola O. O., (2010a) Improved mycoherbicidal activity of Fusarium arthrosporioides. African Journal of Microbiology Research, 4(15): 1659-1662.
6. Babalola O. O., (2010b) Exogenous cellulase contributes to mycoherbicidal activity of Fusarium arthrosporioides on Orobanche aegyptiaca. International Journal of Agronomy Article ID 963259, 4 pages doi:10.1155/ 2010/963259.
7. Babalola O. O., (2010c) Pectinolytic and cellulolytic enzymes enhance Fusarium compactum virulence on tubercles infection of Egyptian broomrape. International Journal of Microbiology. Article ID 273264, 7 pages doi:10.1155/2010/273264.
8. Babalola O. O., Glick B. R., (2012) Indigenous African agriculture and plant associated microbes: current practice and future transgenic prospects. Sci Res Essays, 7: 2431- 2439.
9. Bargabus R. L., Zidack N. K., Sherwood J. W., Jacobsen B. J., (2002) Characterization of systemic resistance in sugar beet elicited by a non-pathogenic, phyllosphere-colonizing Bacillus mycoides, biological control agent. Physiol Mol Plant Pathol, 61: 289-298.
10. Bargabus R. L., Zidack N. K., Sherwood J. W., Jacobsen B. J., (2004) Screening for the identification of potential biological control agents that induce systemic acquired resistance in sugar beet- Biol Control, 30: 342-350.
11. Burgess L. W., Knight T. E., Tesoriero L., Phan H.T., (2008)- Diagnostic Manual for Plant Diseases in Vietnam. ACIAR.
12. Camacho M., Santamaria C., Temprano F., Daza A., (2001)- Coinoculation with Bacillus sp. CECT 450 improves nodulation in Phaseolus vulgaris L. Can J Microbiol, 47: 1058-1062.
13. Chérif M., Sadû N., Benhamou N., oudabbous A., Boubaker A., Hajlaoui M. R., Tirilly Y., (2002)- Ultrastructure and cytochemistry of in vitro interactions of the antagonistic bacteria Bacillus cereus X16 and Bacillus thuringiensis 55T with Fusarium roseum var. sambucinum- J Plant Pathol, 84: 83–93.
14. Choudhary D. K., Johri. B.N., (2009)- Interactions of Bacillus sp. and plants–With special reference to induced systemic resistance (ISR)- Microbiol Res, 164: 493-513
15. Figueiredo M. V. B., Seldin L., de Araujo F. F., Mariano R. d. L. R., (2010) Plant Growth Promoting Rhizobacteria: Fundamentals and Applications. In: DK Maheshwari (Ed.): Plant Growth and Health Promoting Bacteria- Microbiology Monographs. Berlin Heidelberg:ANTAGONISTIC EFFECTS OF BACILLUS SPECIES IN BIOCONTROL OF TOMATO FUSARIUM WILT 215Springer-Verlag, 18, DOI 10.1007/978-3-642-13612-2_2.control 18 and its antibiotic defective mutants. World J Microbiol Biotechnol, 25: 1329- 1335.
16. Gardener B. B. M., (2004)- Ecology of Bacillus and Paenibacillus sp in agricultural systems. Phytopathol, 94: 1252-1258.
17. Grover M., Nain L., Saxena A. K., (2009)- Comparison between Bacillus subtilis RP24 agents in integrated pest management systems: Plant diseases. In: Symposium- The nature and application of biocontrol microbes: Bacillus sp. Phytopathol, 94: 1272-1275.
18. Jacobsen B. J., Zidack N. K., Larson B. J., (2004)- The role of Bacillus-based biological control agents in integrated pest management systems: Plant diseases. In: Symposium- The nature and application of biocontrol microbes: Bacillus sp. Phytopathol, 94: 1272-1275.
19. Jones D. R., (2000)- History of banana breeding. In: D Jones (Ed.): Diseases of Banana, Abaca And Enset. Wallingford, UK: CAB International, pp. 425-449.
20. Kaymak H. C., Yarali F., Guvenc I., Donmez M. F., (2008)- The effect of inoculation with plant growth Rhizobacteria (PGPR) on root formation of mint (Mentha piperita L) Cuttings. Afr J Biotechnol, 7: 4479-4483.
21. Khan M. R., Khan S. M., (2002)- Effects of root-dip treatment with certain phosphate solubilizing microorganisms on the fusarial wilt of tomato Bioresource Technol, 85: 213-215.
22. Kloepper J. W., Ryu C. M., Zhang S., (2009)- Induced Systemic Resistance and Promotion of Plant Growth by Bacillus spp. Phytopathol, 94: 1259-1266.
23. Lamsal K., Kim S. W., Kim Y. S., Lee Y. S., (2012)- Application of rhizobacteria for plant growth promotion effect and biocontrol of Anthracnose caused by Colletotrichum acutatum on pepper. Mycobiol, 40: 244–251.
24. Manikandan R., Saravanakumar D., Rajendran L., Raguchander T., Samiyappan R., (2010)- Standardization of liquid formulation of Pseudomonas fluorescens Pf1 for its efficacy against Fusarium wilt of tomato. Biol. Control, 54:83-89.
25. Pandey D. K., Tripathi N. N., Tripathi R. O., Dixit S. N., (1982) - Fungitoxic and Phytotoxic properties of essential oil of Phylis sauvolensis- Pfkrankh. Pfschutz. 89: 344-346.
26. Prathuangwong. S., Athinuwat D., Chuaboon W., Chatnaparat T., Buensanteai N., (2013)- Bioformulation Pseudomonas fluorescens SP007s against dirty panicle disease of rice. Afr. J. Microbiol. Res. 7:5274-5283.
27. Samavat. S., Heydari A., Zamanizadeh H. R., Rezaee S., Aliabadi A. A., (2014)- Application of new bioformulations of Pseudomonas aureofaciens for biocontrol of cotton seedling damping-off- J. Plant Prot. Res. 54:334-339.
28. Schisler. D. A., Slininger P. J., Behle R. W., Jackson M. A., (2004)- Formulation of Bacillus spp. for biological control of plant diseases- Phytopathology 94:1267-1271.
29. Schmledeknecht. G., Issoufou. I., H. junge., Bochow H., (2001)- Use of Bacillus subtilis as biocontrol agent V biological control of diseases on maize and Sunflowers- J Plant Dis Protect, 108: 500-512.
30. Selvaraj. S., Ganeshamoorthi P., Anand T., Raguchander T., Seenivasan N., Samiyappan R., (2014)- Evaluation of a liquid formulation of Pseudomonas fluorescens against Fusarium oxysporum f. sp cubense and Helicotylenchus multicinctus in banana plantation- BioControl 59:345-355.
31. Siddiqui, Z. A., and Mahmood I., (2002)- Biological control of Meloidogyne incognita race 3 and Macrophomina phaseolina by Paecilomyces lilacinus and Bacillus subtilis alone and in combination in chickpea. Fund. Appl. Nematol., 16: 215– 218
32. Singh. N., Pandey P., Dubey R.C., Maheshwar D. K., (2008)- Biological control of root rot fungus Macrophomina phaseolina and growth enhancement of Pinus roxburghii (Sarg.) by rhizosphere competent Bacillus subtilis BN1- World J Microbiol Biotechnol, 24:1669-1679.
33. Swain M. R., Ray R. C., (2009)- Biocontrol and other beneficial activities of Bacillus subtilis isolated from cowdung microflora. Microbiol Res, 164: 121-130.
34. Thangavelu. R., Palaniswani A., Velazhahan R., (2004)- Mass production of Trichoderma harzianum for managing Fusarium wilt of banana. Agric Ecosyst Environ, 103: 259-263. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Statistics Article View: 1,195 PDF Download: 244 |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
