COMPARISON BETWEEN IRAQI AND EUROPEAN ETHER EXTRACT OF PROPOLIS ON STAPHYLOCOCCUS AUREUS ISOLATED FROM MINCED MEAT

Assiut University web-site: www.aun.edu.eg

COMPARISON BETWEEN IRAQI AND EUROPEAN ETHER EXTRACT OF PROPOLIS ON STAPHYLOCOCCUS AUREUS ISOLATED FROM MINCED MEAT

T.A. ABDULLAH

Department of Veterinary Public Health, College of Veterinary Medicine,

University of Mosul, Mosul, Iraq.

Received: 24 July 2016;   Accepted: 19 September 2016

مقارنة تأثير مستخلص العکبر العراقي والأوروبي على جراثيم المکورات العنقودية الذهبية

 المعزولة من اللحوم المفرومة

تقى أحمد عبد الله

تم في هذه الدراسة عزل وتشخيص جراثيم المکورات العنقودية الذهبية  من اللحوم المفرومة واختبرت حساسية هذه الجراثيم لبعض المضادات الحيوية وتم البحث عن فعالية المستخلص الکحولي للعکبر العراقي المضادة لجراثيم المکورات العنقودية الذهبية مقارنة بفعالية المستخلص الکحولي للعکبر الأوروبي المضادة لنفس الجرثومة  وبالتراکيز (30%,20%,15%,10%) لکلا نوعي العکبر. أعطت 13 عينة وبنسبة 21% نتيجة موجبة لعزل جراثيم المکورات العنقودية الذهبية من اللحوم المفرومة. وأظهر المستخلص الکحولي للعکبر العراقي فعالية مضادة لعترات جراثيم المکورات العنقودية الذهبيةالمعزولة من هذه اللحوم بالترکيز 3 مايکروغرام حيث أعطت قطرا تثبيطيا لنمو هذه الجراثيم بمعدل 18.84 ± 0.256  مقارنة بالعکبر الأوروبي الذي أعطى قطرا تثبيطيا لنمو عترات المکورات العنقودية الذهبية12.84± 0.354  عند الترکيز نفسه, وکانت حساسية هذه الجراثيم أقل للتراکيز الأخرى من المستخلص الکحولي للعکبر مما يدلل على أن المستخلص الکحولي للعکبر العراقي أکثر فعالية ضد جراثيم المکورات العنقودية الذهبية والذي قد يعزى إلى فعالية مرکبات الفلافونيدات والفينولات الداخلة ضمن مکونات العکبر العراقي والتي لها فعالية مضادة للجراثيم. وکانت جميع عترات المکورات العنقودية الذهبية  المعزولة من اللحوم المفرومة في هذه الدراسة حساسة للمضاد الحيوي السفترياکسون بالترکيز  10مايکروغرام في حين کانت هذه الجراثيم مقاومة للمضاد الحيوي الميثاسلين بالترکيز 10 مايکروغرام وکذلک للمضاد الحيوي الجنتامايسين والبنسلين  بالترکيز 10 مايکروغرام لکل منهما.

INTRODUCTION

مقــدمـة

العکبر مادة راتنجية معقدة الترکيب تجمع بواسطة نحل العسل من مصادر نباتية مختلفة ومنذ القدم استخدم العکبر في علاج الکثير من الأمراض ولازال يستخـدم الى يومنا هـذا (Cardile et al., 2003; Castaldo and Capasso, 2002) لما له من صفـات بايـولوجية مضادة للجراثيـم والفطريـات والفيروسـات ومضاد للسرطـان والالتهـابـات وکمضـاد للاکسـدة

Corresponding author: Dr. T. A. ABDULLAH

E-mail address: montaha_hassan99@yahoo.com

Present address: Department of Veterinary Public Health, College of Veterinary Medicine, University of Mosul, Mosul, Iraq.

(Wang et al., 2004; Kartal et al., 2003; Prytzyk et al., 2003; Akao et al., 2003) ان تأثير العکبر المضاد للجراثيم يعود الى احتوائه على بعض المرکبات الفعالة مثل الفلافونيدات والفينولات والاسترات ((flavone, flavonone, phenolic acid, polyphenols (Ishida et al., 2011) ومن بين المرکبات الفعالة التي يحتويها العکبر مرکب caffic acid phenethylester (CAPE) والذي له فعالية تثبيطية للـ Eicosanoids  وتثبيط حامض النيتريک (Cilli et al, 2004) وفعالية مضادة للجراثيم Celik et al., 2007; Havsteen, 2002)). وبينت دراسة اجريت على العکبـر العراقي ان العکبـر العراقي يحتـوي على الفلافونيـدات ومادة بينزيفينـون benzophenon بتـقـنيـة Thin Layer Chromatography (TLC)             (AL-Nema, 2011) وبين Raghukumar et al.,2010; Kilic et al., 2005)) تأثير العکبر علـى المکورات العنقودية المقـاومة للميثاسليـن Methacilline resist staphylococcus aureus (MRSA) ويختلـف العکبر فـي تاثـيره ولـونه ورائحته تـبعا لمـنشئه الجغـرافـي ونـوع النبـات الـذي جمـع منـه العکبـر ومـوسـم جـمعه (Kosalec et al., 2004 ; Kosalec et al., 2003 ; Bankova et al., 2002; Sforcin et al., 2000) تعد جراثيم المکورات العنقودية الذهبية من الجراثيم المهمة والتي تؤثر على الصحة العامة وخاصة الأنواع المقاومة لبعض المضـادات الحيويـة مثل المـکورات العنـقوديـة المـقاومـة للميثاسليـن MRSA  والتي تسـبب العديـد مـن الإصابات التنفسيـة والجلـديـة Yili, 2010; Web, 2010)) وعدت جراثيم المکورات العنقودية الذهبية من أهم جراثيم التسمم الغذائي لکونها تفرز الذيفان المعوي المسبب الرئيسي للتسمم الغذائي .وعزلت (Schlegelova et al., 2004) . الهدف من هذه الدراسة هو التعرف على مدى التأثير التثبيطي للعکبر العراقي والعکبر الأوربي على جراثيم المکورات العنقودية  الذهبية المسببة للتسمم الغذائي المتکرر والناجم عن تلوث اللحوم المفرومة أثناء تداول هذه اللحوم.

MATERIALS AND METHODS

المواد وطرائق البحث

العينات

جمعت 60 عينة من لحوم الأبقار المحلية المفرومة من أسواق مدينة الموصل للکشف عن وجود جراثيم المکورات العنقودية الذهبية فيها. جمع العکبر العراقي من مناطق مختلفة من محافظة نينوى شملت منطقة الغابات والشيخان وربيعة.

طريقة تحضير المستخلص الکحولي للعکبر:

جمد العکبر وبرش ثم وزن 30 غم من العکبر وأذيب في 70 مل من الکحول الاثيلي بترکيز 95% باستخدام خلاط وبدون تسخين من دون تعريضه  للضوء لمدة ثلاثة أيام ورشح بقطعة قماش ناعمة ونظيفة و استخدمت اوراق الترشيح للتخلص من الشوائب الموجودة في المحلول وحفظ الراشح في قناني نظيفة ذات لون داکن بعيدا عن الضوء لمدة أسبوع وتم تبخير الراشح بجهاز الاستخلاص Rotary  للتخلص من الکحول ثم جفد المستخلص باستخدام جهاز Lyophilizer وحضر المستخلص الکحولي للعکبر بالتراکيز 10% ,15% ,20% ,30% عن طريق إذابته في مادة DMSO (Dimethyl sulfoxide) بدالة حامضية7  وعقم بالترشيح عبر مرشحات في 0.22  مايکروميتر. أما المستخلص الکحولي للعکبر الأوروبي تم استيراده من شرکة W.SEIP الألمانية وأذيب بمادة  DMSO للحصول على نفس التراکيز (10%,15% ,20%,30%) وحضرت أقراص الترشيح بقطر 6 ملم ثم غمرت بهذه التراکيز (Lu et al., 2005 ; NCCLS, 2004 ; Krell, 1996).

العزل الجرثومي

وضعت عينات اللحم المفروم في ماء الببتون المجهز من شرکة Defco وحضنت بدرجة 37 º م لمدة  ساعتين ثم نقلت على الوسط الانتخابي وسط الملح وسکر المانيتول المجهز من شرکة Oxoid وحضنت بدرجة 37 º مل مدة 24– 48 ساعة. اخذت المستعمرات النامية على وسط الملح وسکر المانيتول وصبغت بصبغة کرام للتأکد من شکل وتصبغ الجرثومة وتم إجراء اختبار التجلطtest Coagulase على عترات المکورات العنقوديـة الذهبية الناميـة لتوثيـق تشخيـص وجـود المکـورات العنقوديـة الذهبيـة بطريقـة اختبـار الأنبوبـة وتـم الکشـف عـن خميرة التجلـط (Kloos and Lambe, 1991; Martin and Myers,1994). حضر المعلق الجرثومي لعترات المکورات العنقودية الذهبية الموجبة لاختبار خميرة التجلط بأخذ مسحة من الزرع الجرثومي ووضعها في مرق الببتون وحضنت لمدة 24 ساعة على درجة حرارة 37º م واخذ الترکيز 10^-1 خلية جرثومية /سم³ ونشرت على وسط أکار المولر هنتون المجهز من شرکة  Oxoid لاختبار حساسية عترات المکورات العنقودية الذهبية لبعض المضادات الحياتية ووضعت أقراص المضادات الحيوية کالجنتامايسين 10 Gentamycin مايکروغرام والبنسلين Pencilline 10 مايکروغرام والميثاسللين  Methacilline 10 مايکروغرام والسفترياکسون Ceftraixon 10 مايکروغرام التي تم تجهيزها من شرکة Bioanalyze وحسب طريقةKribyand Bare  المحورة auer et al.,1966))  کما وثبتت أقراص العکبر المشبعة بالمستخلص الکحولي لکل من العکبر العراقي والعکبر الأوروبي بالتراکيز 10%,15%,20%,30% لاختبار حساسية عترات جراثيم المکورات العنقودية الذهبية وترکت لتجف ثم حضنت الأطــباق بدرجة 37 مº لمدة 16-18 ساعة وقرئت النتائج بالاعتماد على قطر منطقة التثبيط الجرثومي لکلا النوعين من العکبر وللمضادات الحياتية (Carter  and Wise, 2004; Hendrix, 2002).

RESULTS

النتائــــج

عزلت جراثيم المکورات العنقودية الذهبية منعينات اللحوم المفرومة  حيث أعطت 13 عينة نتيجة موجبة لعزل جراثيم المکورات العنقودية الذهبية وبنسبة 21 % الجدول (1) وکانت جميع هذه العترات موجبة لاختبار تجلط خميرة الـ Coagulase وبينت نتائج اختبار الحساسية لمستخلص العکبر ان عترات المکورات العنقودية الذهبية المعزولة من اللحوم المفرومة حساسة لمستخلص العکبر العراقي بالترکيز3  مايکروغرام حيث بلغ قطر التثبيط فيه لعترات المکورات العنقودية 18.84 ± 0.256 ملم مقارنة بالترکيز 2 مايکروغرام والذي بلغ قطر التثبيط فيه 14.76±0.536 ملم. اما الترکيزين 1,1.5 مايکروغرام من مستخلص العکبر العراقي فقد کان قطر التثبيط لکليهما اقل من الترکيزين 2, 3  مايکروغرام اللذان بلغ  قطر التثبيط فيهما 0.586±13.16±0.427,13.2ملم على التوالي. أما مستخلص العکبر الأوروبي بالترکيز3 مايکروغرام فقد  کان قطر التثبيط لنمو المکورات العنقودية الذهبية12.84±0.354  ملم مقارنة بالتراکيز , 1.5,12,مايکروغرام حيث بلغ قطر التثبيط فيهم.322,9.64± 0.360 ±9.84,9.48±0.322 على التتابع. وکانت عترات المکورات العنقودية الذهبية حساسة لمستخلص العکبر العراقي بالترکيز3  مايکروغرام مقارنة بمستخلص العکبر الاوروبي عند نفس الترکيز وکان هذا الاختلاف معنويا عند مستوى معنوية p<0.05 ) ) حيث بلغ قطر التثبيط لمستخلص العکبر العراقي18.84 ± 0.256  ملم في حين کان قطر التثبيط لنمو المکورات العنقودية الذهبية لمستخلص العکبر الاوروبي12.84±0.354  ملم جدول (2). وعند الکشف عن حساسية عترات المکورات العنقودية الذهبية  المعزولة من اللحوم المفرومة لبعض المضادات الحيوية أظهرت نتائج اختبار الحساسية للمضادات الحيوية أنعزلات المکورات العنقودية الذهبية المعزولة من اللحوم المفرومة مقاومة لکل من المضاد الحيوي الميثاسللين والبنسلين والجنتامايسين بالترکيز10 مايکروغرام وحساسة ﻟلمضاد الحيوي السفترياکسونب الترکيز10 مايکروغرام شکل (1)

الجدول 1: النسبة المئوية لعزل المکورات العنقودية الذهبية من اللحوم المفرومة.

الجدول 2 :معدل قطر تثبيط نمو المکورات العنقودية الذهبية بمستخلص العکبر العراقي والأوروبي.

الشکل (1): حساسية المکورات العنقودية الذهبية المعزولة من اللحوم المفرومة لبعض المضادات الحياتية

DISCUSSION

المناقشـــة

بلغت نسبة عزل المکورات العنقودية الذهبية من اللحوم المحلية في الدراسة الحالية 21% وکانت هذه النسبة اقل من نسبة عزل المکورات العنقودية الذهبية من لحوم الأبقار والتي بلغت 46.6% (Gundogan et al., 2005) وأقل من نسبة عزل المکورات العنقودية الذهبية من لحوم الأبقار المفرومة 34.14% (Yili, 2010) ويعزى ارتفاع نسبة عزل المکورات العنقودية الذهبية في مجمل هذه البحوث الى عدم توفر الشروط الصحية في محلات تداول وتصنيع وبيع هذه اللحوم الأمر الذي جعلها عرضة للتلوث بالمکورات العنقودية الذهبية المسببة للتسمم الغذائي الناجم عن تناول هذه اللحوم الملوثة (Jablonski and Bohach, 2001). وأعزى بعـض الباحثيـن ارتفاع نسبـة عزل المکورات العنقوديـة الذهبية فـي لحـوم الأبقـار المفرومـة إلى أن مصدرهـا المتداوليـن لهـذه اللحـوم من العمال والقصابيـن المصابيـن بآفـات جلدية وعن طريـق العطـاس والسعـال (Jay, 1986) فضلا عن أن مايقارب 50% من الأفراد يحملون هذه الجراثيم بصورة تعايشية وأحيانا قد يکون مصدرها التربة والماء والغبار والهواء (Arbuthnott,1990) وقد يکون مصدر المکورات العنقودية الذهبية بعض أنواع الحيوانات الحقلية کالخيول والکلاب والقطط والتي تکون حاملة لهذه الجراثيم بشکل تحت ألسريري لذا يمکن أن يکون تواجد الحيوانات الحاملة لهذا النوع من الجراثيم احد مصادر التلوث في اللحوم بسبب تواجد الکلاب والقطط في أماکن قريبة من أماکن بيع وتداول هذه اللحوم لذلک تشکل اللحوم المعرضة للتلوث بالمکورات العنقودية الذهبية بعد تصنيعها مصدر خطر على الصحة العامة لمستهلکي هذا النوع من اللحوم(Jablonski and Bohach, 2001) وعند الکشف عن حساسية عترات المکورات العنقودية الذهبية المعزولة من لحوم الأبقار المفرومة لبعض المضادات الحيوية أظهرت هذه العترات حساسية عالية للمضاد الحيوي السفترياکسون بالترکيز 10 مايکروغرام مقارنة بالجنتاميسين والميثاسيللين والبنسلين بنفس الترکيز وتعزى زيادة مقاومة هذه الجراثيم للمضادات الحيوية الى استخدام بعض المضادات الحيوية کإضافات غذائية لأعلاف الحيوانات المزرعية ويضمنها الأبقار فضلا عن الاستخدام العشوائي للمضادات الحيوية کعلاج للحيوانات المريضة(Web, 2010)  ومن خلال  هذه الدراسة سلط الضوء على حساسية المکورات العنقودية الذهبية المعزولة من لحوم الأبقار المفرومة للمستخلص الکحولي للعکبر بنوعيه العراقي والاوروبيE.E.P. کأحد المواد الفعـالة المثبطة لوجود المکورات العنقوديـة الذهبيـة حيث اشارت بحـوث عديـدة الى فعاليـة مستخلـص العکبـر المضادة لهـذه الجراثيـم(Raghukumar et al., 2010;

 Kilic et al, 2005; Fernandes et al., 2003; Fernandes et al., 2001; Sforcin et al., 2000)فضلا عن ما توصل إليها لباحث yaghoubi et al., 2007)) من ان عترات الجراثيم موجبة الکرام اکثر حساسية للعکبر من عترات الجراثيم سالبة الکرام. وتبين من الدراسة أن عترات المکورات العنقودية الذهبية حساسة لمستخلص العکبر العراقي مقارنة بمستخلص العکبر الاوروبي بالترکيـز 3 مايکـروغرام حيـث بلـغ قطـر التثبيـط للعکبـر العراقـي18.84±0.256  وبلـغ قطـر التثبيـط للعکبـر الاوروبي 12.84±0.354 وجاءت هـذه النتائج متفقة مـع دراسـات عديـدة عـن حساسيـة جراثيـم المـکورات العنقوديـة الذهبيـة لمستخـلص العکبـر الکحـولي(Gonsales et al., 2006; Ivan et al., 2005; Pepeljnjak and Kosalec, 2004; Keskin et al., 2001; Kujumgiev et al., 1999; Park et al., 1998; Krol et al., 1993; Detoma and Ozin, 1991) وربما تعزى الاختلافات في تأثيـر العکبـر الى تباين مکونات العکبر التي تختلف تبعا للمنشأ الجغرافي ولموسم الجمع فقد اظـهر التحليـل الکيميـاوي لمستخلص العکبـر العراقـي وجـود مرکبات الفلافونيدات والفينولات والبنزوفينـون بأستخـدام تقنيـة TLC(AL-Nema, 2006) وهذا ما أکده Budock,1998)) الذي توصل الى تباين اختلاف تأثير العکبر المضاد لجراثيم المکورات العنقودية الذهبية تبعا لترکيبه الکيمياوي وجاءت هذه النتائج متفقة مع توصل اليه الباحثيـن من ان نوعيـة وکميـة المـواد التي يتکون منها العکبـر تلعب دورا مهما في الفعاليـة الحيويـة للعکبـر ضد الجراثيـم المسببـة للتسمـم الغذائـي وبضمنـها المکورات العنقوديـة الذهبيـة(Hikmet and Nazime, 2006; Santos et al., 2002; Hegazi and Abd El Hady, 2001; Hegazi et al., 2000a; Hegazi et al.,   2000b; Kujumgiev et al., 1999) ; وفي دراسة أجراها الباحث (Popova et al., 2007) على مستخلص العکبر الکحولي لمناطق مختلفة من اوربا والشرق الاوسط تبين ان مستخلص العکبر يحتوي على الفلافونيدات والتي تضم الفلافونون flavonon والفلافون flavon والفلافونولس flavonols والفينولات التي تقوي وتعـزز تأثيرها المثبط لنمو هذه الجراثيم. وفسرت بعض البحوث العلمية الميکانيکيات التي يؤثر من خلالها العکبر على نمو الجراثيـم ومنها التأثيـر المثبـط لنمـو الجراثيـم المتمثـل بتأثيـره المثبط لانقسام الخلية الجرثومية  وتأثيـره على غشـاء الخليـة والسايتوبـلازم حيث  يؤدي الى انکماش غشـاء الخلية ويعمل على تحلل البکتريا من خلال تثبيطـه لتصنيـع البروتين وتثبـط انزيـمRNA –Polymarase (Koo et al., 2000; Takaisi and Schilcher, 1994; Ikeno et al., 1991). وقد توصل  (El-Bassiony et al., 2012)إلى أن العکبر لا يستخدم فقط في حفظ الغذاء بل في معالجة الأمراض التي تنتج من الإصابة بالمکورات العنقودية الذهبية  خاصة العترات المقاومة لبعض المضادات الحيوية وأهمها الميثاسيللين مثل MRSA. .وهذا ما أکده الباحث (kilic et al., 2005) من انه بالإمکان اعتماد العکبر کبديل للمضادات الحيوية في علاج الإصابة بجراثيم المکورات العنقودية الذهبية وخاصة العترات المقاومة للميثاسلين MRSA حيث أن العکبر يمنع نمو عترات المکورات العنقودية الذهبية والتي أصبحت أکثر شيوعا في السنوات الحديثة. قد تعود عترات المکورات العنقودية الذهبية التي أظهرت مقاومة تامة للمضاد الحيوي الميثاسيلين إلى نوع  MRSAکونها احد مسببات الأمراض التي منشأها الغذاءfoodborne disease Raghukumar et al., 2010 )).

REFERENCES

المراجع

Akao, Y.; Maruyama, H.; Matsumoto, K.; Ohguchi, K.; Nishizawa, K. Sakamato, T.; Araki, Y.; Mishima, S. and Nozawa, Y. (2003): Cell growth inhibitory effect of cinnamic acid derivatives from propolis on human cell line s. Pharmaceut. Bull. 26(7):1075-1095.

AL-Nema, M.M. (2006): An Analytical and histological study of a new roof canal filling material composed of Iraqi propolis, beeswax and vanillin, P.H.D. thesis The College of Dentistry, University of Baghdad.

Arbuthnott, J.P. (1990): Staphylococcal toxins in human disease. Journal of Applied  Bacteriology Supplement,101S-107S .

Bankova, V.; Popova, M.; Bogdanov, S. and Sabatini, A. (2002): Chemical composition of European propolis: expectedand unexpected results. Z. Naturforsch; 57: 530-533.

Bauer, A.W.; Kirby, W.N.; Sheris, J.C. and Tuck, M. (1966): Antibioticsusceptibility by standard single disc method. Am.  J. Clin. Pathol. 36: 493-496.

Burdock, G.A. (1998): Review of the biological properties and toxicity of bee propolis (propolis), Food Chem. Toxicol. 36: 347-363.

Cardile, V.; Panico, A.; Gentile, B.; Borrelli, F. and Russa, A. (2003): Effect of propolis on human cartilage and chondrocytes. Life Sci , 1027-1035.

Carter, GR. and Wise, DG. (2004): Essentials of Veterinary Bacteriology and Mycology.6 thed Iowa State Press. USA. pp: 82- 83.

Castaldo, S. and Capasso, F. (2002): Propolis, an old remedy used in modern medicine. Fitoterapia; 73 Suppl 1: 51-56.

Celik, S.; Gorur, S.; Aslantas, O.; Erdogan, S.; Ocak, S. and Hakverdi, S. (2007): Caffeic acid phenethyl ester suppresses oxidative stress in Escherichia coliinduced pyelonephritis in rats. Mol. Cell. Biochem. 297(1-2): 131-138.

Cilli, N.; Barbara, M.; Luana, K. Di-agam, S.M.; Cosmo, R. and Domenico, R. (2004): Development and validation of a liquid chromatographic-tandem mass spectrometric method for the determination of caffeic acid phenethyl ester in rat plasma and urine. Journal of Chromatography, 810: 129-136.

Detoma, P. and Ozin, O.I. (1991): Propolis activity on microorganism from hospital source. Ann. Microbiol., 41: 231-236 .

El-Bassiony, T.A.; Saad, N.M. and El-Zamkan, M.A. (2012): Study on the antimicrobial activity of Ethanol Extract of Propolis against Methicillin – Resistant Staphylococcus aureus in lab prepared Ice – cream. Vet. World, 5 (3): 155-159.

Fernandes, J.A.; Balestrin, E.C.C. and Cunha, M.L.R.S. (2003): Anti–Staphylococcus aureus activity of bee propolis extracts prepared with different ethanol concentrations. Rev. Cienc. Farm. 24: 147-152.

Fernandes, J.A.; Leomil, L.; Fernandes, A.A.H. and Sforcin, J.M. (2001): The antibacterial activity of propolis produced by Apismellifera L. and Brazilian stingless bees. J. Venom. Anim. Toxins 7: 173-182.

Gonsales, G.Z.1.; Orsi, R.O.1.; Fernandes Junior, A.II.; Rodrigues, P.I and Funari, S.R.C.I. (2006): Antibacterial activity of propolis collected in different regions of Brazil. J. Venom. Anim. Toxins incl. Trop. Dis vol.12 (20): 276-284.

Gundogan, N.; Citak, S.; Yucel, N. and Devren, N. (2005): A noteonthe incidence and antibiotic resistance of Staphylococcus aureus isolated from meat and chicken samples. Meat sci. 69:807-810. 

Havsteen, B. (2002): The biochemistry and medicinal significance of flavonoids. Pharmacol Therapeu. 96: 67-202.

Hegazi, A.G.; Abd El Hady, F.K. and Abd Allah, F.A.M. (2000a): Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis. Z. Naturforsch. 55. 71-75.

Hegazi, A. and Abd El Hady, F. (2001): Egyptian propolis: 1. Anti antimicrobial activity and chemical composition of upper Egypt propolis. Z. Naturforsch; 56(1-2): 82-8.

Hegazi, A.G.; Farghali, A.A. and Abd El Hady, F.K. (2000b): Antiviral activity and chemical composition of European and Egyptian propolis In: International Conference of Propolis Argentina, September: 99.

Hendrix, CM. (2002): Laboratory Procedures for Veterinary Technicians. 4^thed Mosby, USA.: 217-218.

Hikmet, K. and Nazime, M. (2006): Antimicrobial activity and chemical compositions of Turkish propolis from different region. African Journal of Biotechnology. 5(11):1151-1153.

Ikeno, K.; Ikeno, T. and Miyazawa, C. (1991): Effects of propolis on dental caries in rats. Caries Res 25: 347-351.

Ishida, V.F.C.G.; Negri, A.; Salatino, and Bandeira, M.F.C.L. (2011): “Anewtype of Brazilian propolis: prenylatedbenzophenonesinpropolis from Amazonanects against cariogenicbacteria,” Food Chemistry. 125 (3): 966–972.

Ivan, K.M.; Pepeljnjak, S.; Bakmaz, M. and Vladmir-Knezevic, S. (2005): Flavonoid analysis and antimicrobial activity of commercially available propolis products. Acta  Pharm. 55: 423-30.

Jablonski, L.M. and Bohach, G. (2001): Staphylococcus aureus. In M.P. Doyle, L.R. Beuchat and T.J. Montvill, Food microbiology: Fundamentals and frontiers. Washington. DC: ASM Press.

Jay, J. (1986): Staphylococcal gastroenteritis. In modern food microbiology (3rded.) New York: Van Nostrand Reinhold. 437-458.

Kartal, M.; Yildiz, S.; Kaya, S.; Kurucu, S. and Topcu, G. (2003): Antimicrobial activity of propolis samples from two different regions of Anatolia. J. Ethnopharmacol. 86: 69-73.

Keskin, N.; Hazir, S.; Baser, K.H. and Kurkcuoglu, M. (2001): Antibacterial activity and chemical composition of Turkey propolis. Z Naturforsch. 56(11-12): 1112-1115.

Kilic, A.; Baysallar, M.; Besirbellioglu, B.; Salih, B.; Sorkun, K. and Tanyuksel, M. (2005): In vitro antimicrobial activity of propolis against -methicillin-resistant S.aureus and vancomycin-resistant Enterococcus faecium. Annals of Microbiol. 55:113-117.

Kloos, W.E. and Lambe, D.W. (1991): Staphylococcus. in: Manual of Clinical Microbiology. A.balows, W.J.; Hausler, K.; Herrman, H.; Isenberg and H.J. Shadomy. American Society for Microbiology. Washington, DC. 222-237.

Koo, H.; Rosalen, P.L.; Cury, J.A.; Ambrosano, G.M.B.; Murata, R.M. and Yatsuda, R.; (2000): Effect of a new variety Apismellifera propolis on mutans Streptococci. Curr Microbiology; 41:192-4.

Kosalec, I.; Bakmas, M. and Pepeljnjak, S. (2003): Analysis of propolis from continental and Adriatic regions of Croatia. Aeta pharm. 53:275-285.

Kosalec, I.; Bakmaz, M.; Vladimir-Knezevic, S. and Pepeljnjak, S. (2004): Quantitative analysis of the flavonoids in raw propolis from northern Croatia, Acta Pharm. 54: 65-72.

Krell, R. (1996): Value added products from beekeeping FAO Agricultural Services Bulletin No. 124. Chapter V. http://www.fao.org/docrep/w0076e/w 0076e00.htm.

Krol, W.; Scheller, S.; Shani, J.; Pietsz, G. and Czuba, Z. (1993): Synergistic effect of ethanolic extract of propolis and antibiotics on the growth of Staphvlococcus aureus. Arzneimittel-forsch 43: 607-609.

Kujumgiev, A.; Tsvetkova, I.; Serkedjieva, Y.; Bankova, V.; Christov, R. and Propov, S. (1999): Antibacterial, antifungaland antiviral activity of propolis of different geographic origin. Ethnopharmacol. 63(3): 235-40.

Lu, L.; Chen, Y. and Chou, Ch. (2005): Antibacterial activity of propolis against Staphylococcus aureus. Inter. J. Food Microbiology.102: 213-220.

Martin, S.E. and Myers, E.R. (1994): Staphylococcus aureus. in: Food borne Disease Hand book. Diseases Caused by bacteria. Vol.1.Y.H. Hui, J.R. Gorham, K.D. Murrell and D.O. Cliver, Marcel Dekker Inc., New York. NY. 345-394.

National Committee for Clinical Laboratory Standards, NCCLS. (2004): Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; 14^th informational supplement Wayne, PA, USA. 24(1): M100-S14.

Park, Y.K.; Koo, M.H.; Abreu, J.A.S.; Ikegaki, M.; Cury, J.A. and Rosalen, P.L. (1998): Antimicrobial activity of propolis on oral microorganisms. Curr.Microbiol. 36:24-28.

Pepeljnjak, S. and Kosalec, I. (2004): Galangin expresses bactericidal activity against multiple-resistant bacteria: MRSA, Enterococcus spp. and pseudomonas aeruginosa. FEMS. Microbial. Lett. 240:111-116.

Popova, M.P.; Bankova, V.S.; Bogdano, S.; Tsvetkova, I.; Naydenski, C.; Marcazzan, G.L. and Sabatin, A.G. (2007): Chemical characteristics of popular type propolis of different geographic origin. Apidologie 38, 306-311.

Prytzyk, E.; Dantas, A.P.; Salomao, K.; Pereira, A.S.; Bankova, V.S.; DeCastro, S.L. and Aquino-Neto, F.R. (2003): Flavonoids and trypanocidal activity of Bulgarian propolis. J. Ethnopharmacol. 88:189-193.

Raghukumar, R.; Vali, L.; Watson, D.; Fearnley, J. and Seidel, V. (2010): Antimethicillin-resistant S.aureus (MRSA) Activity of pacific propolis and Isolatedprenylflavanones. Phytother. Res. (www.interscience. Wiley.com) DOI:10.1002/prt.3096.

Santos, F.A.; Bastos, E.M.A.; Uzeda, B.; Carvalho, M.A.R.; Farias, E.S.A. and Braga, F.C. (2002): Antimicrobial activity of Brazilian propolis and fractions against oral Anaerobic bacteria. Ethnopharmacol. 80:1-7.

Schlegelova, J.; Napravnikova, E.; Dendis, M.; Horvath, R.; Benedik, J. and Babak, V. (2004): Beef carcass contamination in slaughterhouse and prevalence of resistance to antimicrobial drugs in isolates of selected microbial species. Meat Science. 66: 557-565.

Sforcin, J.M.; Femandes, J.A.; Lopes, C.A.M.; Bankova, V. and Funari, S.R.C. (2000): Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. J. Ethnopharmacol. 73: 243-249.

Takaisi-Kikuni, N.B. and Schilcher, H. (1994): Electron microscopy and microcalorimetric investigations of the possible mechanism of the antibacterial action of a defined propolis provenance. Planta. Medica 60:222-227.

Wang, B.J.; Lien, Y.H. and Yu, Z.R. (2004): Supercritical fluid extractive fractionation study of the antioxidant activities of propolis. Food Chem. 86: 237-243.

Webmd. (2010): http:// www. Webmd.com/skin-problems –and –treatments /understanding –mrsa-mithacillin-resistant-staphylococcus aureus.

Yaghobi, S.M.J.; Ghorbani, G.R.; Soleimanian, Z.S. and Satari, R. (2007): Antimicrobial activity of Iranian propolis and its chemical composition. DARU Vol.15, (1).

Yili (2010): Isolation and characterization of antimicrobial resistant Staphylococcus aureus in retail ground meats. M.S. Thesis, University of Maryland.