THE EFFECT OF IMMUNOLOGICAL ENHANCERS ON SPECIFIC IMMUNITY OF INFECTIOUS BURSAL DISEASE VIRUS USING VIRAL CHALLENGES TESTS

Assiut University web-site: www.aun.edu.eg

THE EFFECT OF IMMUNOLOGICAL ENHANCERS ON SPECIFIC IMMUNITY OF INFECTIOUS BURSAL DISEASE VIRUS USING VIRAL CHALLENGES TESTS

MONA AL. SHARABI

PhD of Poultry Diseases, Faculty of Vet. Med., Al-Baath University, Hama, Syria

Received: 12 February 2017;       Accepted:30 March2017

تأثير المحسنات المناعية على المناعة النوعية لفيروس مرض الجراب المعدي باستخدام اختبارات التحدي الفيروسية

منى الشرابي

دکتوراه في أمراض دواجن , کلية الطب البيطري , جامعة البعث, حماه ,  سوريا

E-mail: d.mona.sharabi@hotmail.com          Assiut University web-site: www.aun.edu.eg

أجريت الدراسة على (100) طائر من إحدى الهجن التجارية لدجاج اللحم لمعرفة تأثير المحسن المناعي (خميرة البيرة) أوخميرة الخبز على المناعة النوعية لمرض التهاب الجراب المعدي (الجمبورو) وذلک باستخدام اختبار التحدي. أثبتت الدراسة وجود فروق معنوية واضحة بين مجموعة الشاهد ومجموعة الدراسة التي اضيف لعلفها خميرة البيرة  بالنسبة لمعايير الأضداد لمرض التهاب الجراب المعدي حيث کانت قيمة  p=(0.01) بعمر 34 يوم وکانت قيمة p=(0.002)بعمر 42 يوم.

الکلمات المفتاحية: النيکلوتيدات النووية,  (nucleotides), خميرة الخبز او البيرة (Brewer`s Yeast), (Saccharomyces Cerevisiae), المناعة النوعية عند دجاج اللحمSpecific, Immunity of Broiler Chickens) )

INTRODUCTION

المقدمــــــة

 من احدى عوامل التربية الناجحة لتحقيق الربح في تربية الدواجن تحقيق تحسن في کفاءة الجهاز المناعي ضد الأمراض المختلفة لقطعان المزارع .ويتحقق هذا من خلال تخفيض وبائية الأمراض إلى حدها الأدنى ، وقد أصبحت المناعة الغذائيةImmunitynutritional  تلعب دوراً مهماً في الوقاية من الأمراض المعدية Yamauchi et al., 2002)) وأصبح التوجه اليوم نحو ما يسمى بالعلوم الوبائية الحديثة للطب الوقائي، وذلک من خلال تحفيز مناعة طبيعية لدى الطائر. ويتم تحقيق ذلک من خلال تحسين الوظيفة الطبيعية للجهاز المناعي، والذي يمکن أن يساعد في مواجهة تحدي الأمراض المحتملة، ، ولذلک کان لا بد من اللجوء إلى نوع من المحسنات المناعية الطبيعية دون أن يکون لها تأثير على نوعية اللحم المنتج، وفي السنوات الأخيرة تمت دراسة العديد من هذه المواد المحسنة، مثل النيوکلوتيدات النووية (nucleotides) والتي تتوافر في الخمائر خميرة الخبز أ و(خميرة البيرة) وتعد النيوکلوتيدات النووية ومثيلاتها مواد تم الاهتمام بها في السنوات الأخيرة کمعدلات (محورات) مناعية کامنة Immune-modulators.

 فهي تلعب دوراً في العديد من الوظائف الفسيولوجية الأساسية بما فيها تشکيل المعلومات الوراثية Genetic informations ، وکوسيط في الطاقة الإستقلابيةMediating metabolic (energy Carver and Walker., 1995 and Aggett      et al., 2002)، وقد سجل الباحثون (Aggett et al., 2002; and Adjei et al.,1993)، إن إضافتها کمتممات علفية

Corresponding author: Dr. MONA AL. SHARABI

E-mail address:d.mona.sharabi@hotmail.com

Present address: Poultry Diseases, Faculty of Vet. Med., Al-Baath University, Hama, Syria

يمکن أن يحرض ويحسن المناعة الخلوية الوسيطة Cell –mediated immunity (Van Buren et al., 1983) ، ويؤدي لإنتاج اللمفاويات  Lymphocyte proliferation (Yamauchi et al., 1996) ويحسن مقاومة الطائر للأخماج الجرثومية. وفي السنوات القليلة الماضية تم استخدام النيوکلوتيدات النووية عن طريق الفم لتحسين الوظائف المناعية ، وتحسين فعالية اللقاح ، ومقاومة الأمراض.

کما تم استخدام خميرة الخبز أو البيرة Brewer`s yeast , أو ما يدعى بالاسم العلمي سکاروميسيسسيرفيسيا Saccharomyces Cerevisiae . بشکلٍ مقتولٍ أو (معطلٍ) کمتمم علفي , في تغذية الدواجن نظراً لاحتوائها على قيمةٍ غذائيةٍ مرتفعةٍ , وعدم وجود آثارٍ سلبيةٍ عند استخدامها بنسبٍ محدودةٍ کمتممٍ علفي.(Carter and Phillips, 1944, Bhattacharjee, 1970).

کما وجد الباحث (Stone, 1998) , أن استخدام خميرة سکاروميسيسسيرفيسيا في تغذية دجاج اللحم کمادةٍ طبيعيةٍ توفر الفيتامينات وخاصة مجموعة فيتامين B وکذلک البروتين ذو القيمة البيولوجية العالية.

وفي أبحاث أخرى مشابهة وجد الباحث (Cruichshank, 2002.) , أن خميرة الخبز عملت على تحسين الهضم والامتصاص للمواد الغذائية , وسيطرت على الأمراض المعدية المعوية الناجمة عن بعض المسببات المرضية وأدت لتحسن مناعي واضح اضافة إلى تحسن في معامل التحويل العلفي.

کما وجد الباحثون(Mickolos et al., 2003)  أن مشارکة التحصين مع اعطاء محسن مناعي ، أدى لزيادة في مستوى معيار الأجسام المضادة المناعية بشکل مرتفع ، وإن الاستمرارية في إعطاء المحسن المناعي أعطت نتائج أفضل بکثير فيما لو أعطي اللقاح منفرداً حيث ان المحسن المناعي زاد من نسبة الحماية عند التحصين

MATERIALS AND METHODS

المواد والطرائق

مواد العمل Materials :

1- الصيصان :

تم تربية (100) طائر مختلط (ذکور, اناث) بعمر يوم واحد من أحد الهجن التجارية (رووس) ، تم الحصول عليها من إحدى المزارع التجارية لتربية قطعان أمات دجاج اللحم (الفروج) ، ُقدمت للطيور عليقةً محبحبةً بمراحل مختلفة (مرحلة أولى ومرحلة ثانية) .

2-خميرة البيرة:

استخدمت خميرة البيرة Brewer`s yeast , أو ما يدعى بالاسم العلمي سکاروميسيسسيرفيسياSaccharomyces Cerevisiae , بشکلٍ مقتولٍ کمتممٍ علفي على شکل بودرة تم خلطها مع العلف المستخدم حسب خطة الدراسة (1000جرام /طن من العلف) أثناء عملية تصنيع العلف المستخدم في التجربة بعد أن تم تحضيرها بشکلٍ مقتولٍ من خلال تعريضها للبخار لمدة (4) ساعات مع الحفاظ على درجة حرارتها (71˚) م وتم حفظها بالبراد في الدرجة (4˚) م في حاويات مغلقة ومن ثم تم تعقيمها قبل الاستعمال بوضعها بالأوتوغلاف أو ما يدعى بالصاد الموصد لمدة (20) دقيقة.

3- معلق العدوى التجريبية (التحدي) 

تم تحضير معلق غدة فابريشص حسب طريقة الباحثين (Wu et al., 2000), حيث أخذت غدة فابريشص من طيور مصابة سريرياً بمرض الجراب المعدي, تم تقطيع غدة فابريشص إلى قطع صغيرة وطحنها بشکل جيد ومن ثم وضعها في محلول HBSS ثم تم تثفيلها بسرعة (2500) دورة بالدقيقة ولمدة (10) دقائق .وتم الحصول على معلق الخلايا المعدية أما الراسب الخلوي فتم وضعه في محلول الدارئه الفوسفاتية  Phosphate buffered saline (PBS)والتي تحتوي في (1000) مل منه على ما يلي:

(8.00g NaCl ,0.20g KCl ,2.89g Na2HPO4.12H2O,0.20g KH2Po4 ,PH 7.2)

وحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق لتحلل الأنسجة الخلوية بعد ذلک أخذ المعلق الخلوي الناتج عن الراسب وأضيف للمعلق السابق الناتج عن التثفيل وتم تکرير غسل الراسب مرتين بمحلول  HBSS .

طرق العمل : Methods

1- مجاميع الدراسة  The Study Groups:

استخدم (100) صوص  بعمر يوم  واحد ، نوع رووس ،  ُقسمت الطيور کالتالي:

المجموعة الأولى : وهي مجموعة الشاهد  شملت (50) طيراً قدمت لها عليقةٌ محبحبةٌ خاليةٌ من أي محسن مناعي.

المجموعة الثانية : وقد شملت (50) طيراً قدمت لها عليقةٌ محبحبة تحتوي على خميرة الخبز المحلية بمقدار (1000) جرام |طن بدءاً من اليوم الأول وحتى نهاية التجربة بعمر (45) يوماً.

وقد تم  تغذية الطيور بعلف محبحب ، وتم مراعاة الاحتياجات الغذائية حسب متطلبات الطيور في جميع مراحل التربية .فکان بروتين المرحلة الأولى (22%) والطاقة (3000)  ک.ک/کغ مادة جافة ، أما بروتين المرحلة الثانية (20%) والطاقة (3200) ک.ک /کغ مادة جافة.

وتم تحصين الطيور لجميع مجاميع الدراسة بنفس جرعة ونوعية اللقاح کما هو موضح بالجدول رقم (1)

الجدول رقم 1: برنامج تحصين طيور التجربة.

2- طريقة إجراء الاختبار Test procedure:

بعد أن تم تحضير معلق فيروس الجمبورو, أضيف له صادات لمنع التلوث الجرثومي ومن ثم تم إعطاء الطيور 0,5 مل من المستحلب المذکور عن طريق الفم, وقد تم إعطاؤه لمجاميع التجربة في عمر (26) يوماً من عمر الطيور.

تمت مراقبة الطيور في مجموعات التحدي والشاهد  ثلاث مرات في اليوم، ولمدة (16) يوماً حيث سجلت حالات النفوق والإمراضية  يومياً، في مجاميع الاختبار خلال فترة التربية کاملة من بداية إجراء الاختبار وحتى النهاية, وتم تشريح الطيور النافقة وتشريح عدد من الطيور الحية لمراقبة التغيرات التشريحية المرضية النوعية للمرض، إذ لُوحظ على الطيور المصابة بعد الاختبار بعض الأعراض والآفات التشريحية المميزة لمرض الجمبور.

3- طرق أخذ عينات الدم Blood Samples

تم أخذ عينات الدم بعد أسبوع  من إحداث العدوى التجريبية حيث تم جمع (75) عينة دم من الوريد الجناحي لطيور مجاميع الدراسة, حسب الباحث کاميرون (Cameron , 1999)  تم تثفيلها  بالمثفلة وفصل المصل بأنابيب ابندروف, وتم وضعها في المجمدة ليتم إجراء الاختبارات المصلية ومعايرة الأجسام المضادة المناعية النوعية لمرض الجمبورو فيما بعد، وذلک باستخدام اختبار المقايسة المناعية الأنظيمية . (Enzyme Linked Immunosorbent- Assay ) (ELISA) . لها اختبار الاليزا. ومن ثم تم أخذ العدد السابق نفسه من عينات الدم بعد الأسبوع الثاني من إجراء العدوى التجريبية (التحدي).

4- الاختبارات المصلية Serological Tests  :

أجريت الدراسة المصلية باستخدام اختبار المقايسة المناعية المرتبطة بالأنظيمEnzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)  لمعرفة مستوى الأضداد النوعية لمرض الجراب المعدي  في مصل الدم ، و يعد هذا الاختبار هو المفضل في عمليات التقصي المصلي لأعداد کبيرة من العينات بالنسبة لمرض الجراب المعدي (IBD)( Lee and Lin,1992) . واستخدمت طريقة الباحثون (Pick and Mizel., 1981). لإجراء الاختبار وخطوات العمل حسب توصيات الشرکة المنتجة للمجموعة التشخيصية.

يتم قراءة طبق الاختبار باستخدام قارئ الاليزا وعلى موجة بطول (405) نانومتر الذي يقيس معدل الامتصاص في کل حفرة, أو قيم الکثافة البصريةOptical Density  (OD) يحسب معيار الأضداد حسب العلاقة :

S/P= (Abs Test Sample – Abs Negative) / (Abs Positive – Abs Negative)

Log 10 Titre = 0.870 X (Log 10 S/P) + 3.92

Titre =Antilog of log 10 Titre

5- طريقة التحليل الإحصائي Statistic Analysis Method

استخدم برنامج التحليل على الحاسوب ((Statistics, 1998 ، لإجراء جميع التحاليل الإحصائية في هذه الدراسة.

درست الفروق لمعايير الأجسام المضادة المناعية بين مجاميع الدراسة المختلفة باستخدام  طريقة التحليل الوحيدة للفرقOne Way Analysis of Variance.

RESULTS

النتائــج

مقارنة معايير الأَضداد لمجاميع طيور العدوى التجريبية ( التحدي) بعمر 34 يوماً باستخدام طريقة التحليل الوحيدة للفرق: One way – Analysis of Variance (AOV)

بمقارنة معايير الأضداد المناعية النوعية لمرض الجراب المعدي بين مجاميع الدراسة الخاصة باختبار التحدي حيث کان عمر الطيور (34) يوماً أي بعد أسبوع من إجراء التحدي, تبين وجود فروق معنوية بين مجموعة الشاهد  التي لم يقدم لها مع غذائها خميرة البيرة ومجموعة التجربة التي قدم لها الخميرة مع غذائها منذ بداية التجربة وحتى النهاية حيث کانت (P=0.01< 0.05). والنتائج موضحة في الجدول (2).

الجدول رقم 2: مقارنة معايير أضداد مرض الجراب المعدي  لطيور مجاميع التحدي عمر الطيور (34) يوماً بعد أسبوع من التحدي.

المخطط رقم (1) المتوسط الحسابي لمعايير أضداد مرض الجراب المعدي لطيور مجاميع التحدي عمر الطيور (34) يوماً بعد أسبوع من التحدي

مقارنة معايير الأَضداد لمجاميع طيور التحدي بعمر 42 يوماً باستخدام طريقة التحليل الوحيدة للفرق : One way – Analysis of Variance (AOV)

بمقارنة معايير الأضداد المناعية النوعية لمرض الجراب المعدي بين مجاميع الدراسة الخاصة باختبار التحدي حيث کان عمر الطيور (42) يوماً أي بعد أسبوعين من إجراء التحدي تبين وجود فروق معنوية بين مجموعة الشاهد التي لم يقدم لها مع غذائها خميرة البيرة, ومجموعة التجربة التي قدم لها الخميرة مع غذائها منذ بداية التجربة وحتى النهاية حيث کانت (P=0.002< 0.05) والنتائج موضحة في الجدول رقم (3).

الجدول رقم 3: مقارنة معايير أضداد مرض الجراب المعدي  لطيور مجاميع التحدي عمر الطيور (42) يوماً أي بعد أسبوعين من التحدي.

المخطط رقم (2) المتوسط الحسابي لمعايير أضداد مرض الجراب المعدي لطيور مجاميع التحدي  عمر الطيور (42) يوماً أي بعد أسبوعين من التحدي

DISCUSSION

المناقشة

قدمت هذه الدراسة  فکرة واضحة عن الاستجابة المناعية التي تبديها الطيور لدى استخدام المحسنات المناعية (خميرة الخبز أو البيرة Brewer`s yeast) عند احداث عدوى تجريبه (اختبار التحدي) بفيروس مرض خطير يصيب الدواجن ويؤثر على جهازها المناعي وهو مرض التهاب الجراب المعدي.

وعند مقارنة معايير الأضداد المناعية لمرض التهاب الجراب المعدي بين مجموعة طيور الشاهد التي أجري لها عدوى تجريبية, و لم يضف إلى غذائها خميرة البيرة, , ومجموعة طيور التجربة التي أضيف إلى غذائها خميرة البيرة طوال فترة التربية .  بعمر (34) يوماً والتي تم خمجها بفيروس الجمبورو تبين وجود فروق معنوية حيث کانت p=0.01 حيث بلغت المتوسطات الحسابية لمعايير الأضداد المناعية لمرض الجمبورو في مجموعة الشاهد ( 3801 ), بينما کانت القيم في مجموعة طيور التجربة (6088), هذا ما يفسر لنا أن المحسن المناعي, وهو خميرة البيرة ساهمت في رفع مناعة الطيور التي تم خمجها بفيروس الجمبورو, مما ساهم على قدرتها على تحمل الإصابة بالعدوى فکانت معايير الأضداد المناعية النوعية لمرض الجمبورو في طيور التجربة التي تلقت مع غذائها الخميرة , أعلى من تلک في الشاهد التي لم تتلق مع غذائها الخميرة و توافقت الدراسة مع الباحثين (Navarro et al., 1996) حيث أکدوا أن إضافة النيکلوتيدات النووية المناعية لها تأثير محفز للجهاز المناعي ويؤدي لإنتاج أضداد مناعية کما توافق مع الباحثين (Hirai and Shimakura., 1974) الذين أکدوا انخفاض معايير الأضداد المناعية ومستويات الحماية عند إجراء عدوى تجريبية بمرض الجراب المعدي لطيور بعمر 4 أو 6 أسابيع .

وعند مقارنة معايير الأضداد المناعية لمرض التهاب الجراب المعدي بين مجموعة طيور الشاهد, التي أجري لها عدوى تجريبية ومجموعة طيور التجربة بعمر(42) يوماً والتي تم خمجها أيضاً بفيروس الجمبورو تبين وجود فروق معنوية حيث کانت  p0.002 حيث بلغت المتوسطات الحسابية لمعايير الأضداد المناعية لمرض الجمبورو في مجموعة الشاهد (4673)  بينما کانت تلک القيم في مجموعة طيور التجربة (7233) هذا يفسر لنا أن (خميرة البيرة ), ساهمت في رفع قدرة الطيور على تحمل الإصابة بالعدوى التجريبية (التحدي) وکان هذا جلياً من خلال معايير الأضداد المناعية, بين مجموعة الدراسة والشاهد وهذا يتوافق مع نتائج الباحثين (Hirai and Shimakura., 1974).

توافقت هذه الدراسة أيضاً مع (Onifade and Babatunde, 1998) حيث أن إضافة خميرة الخبز تزيد مقاومة الطائر للأمراض المعدية , و أيضا مع (Navarro et al., 1996) حيث أکد أن إضافة النيوکلوتيدات النووية المناعية لها تأثير محفز للجهاز المناعي, ويؤدي لإنتاج أجسام مضادة مناعية کما أنه يحسن إنتاج الأضداد 0(Ig) بشکل عام.

وتوافقت هذه النتائج مع العديد من الأبحاث السابقة التي استخدمت خميرة الخبز کمحسن للمناعة وللنمو حيث وجد     (Yalcin et al., 1993 and Yadav et al., 1994) اتفاقاً مع هذه الدراسة.

وتوافقت مع الباحث (DormitorioA et al., 2005) الذي تناول في دراسته العديد من المحسنات المناعية ومحسنات النمو کالعصيات اللبنية وبعض الخمائر ولاحظ ان جميعها يعمل على تحريض الاستجابة المناعية وبدرجات متفاوتة وبطرق آلية متقاربة التأثير على الجهاز المناعي.

CONCLUSION

الاستنتـاج

مما سبق نجد أنه تم الحصول على أفضل النتائج للاستجابة المناعية لدى اعطاء المحسنات المناعية مثل خميرة البيرة لدى احداث عدوى تجريبية  حيث أنها عززت ودعمت وآزرت الجسم في احداث استجابة مناعية عالية من خلال تشکيل اجسام مضادة مناعية مقاومة للإصابة بفيروس التهاب الجراب المعدي

REFERENCES

المراجــع

Adjei, A.A.; Takamine, F.; Yokoyama, H.; Shiokawa, K.; Matsumoto, Y. and Asto, L. (1993): The effects of oral RNA and Intraperitoneal Nucleoside- Nucleotide Administration on Methillin- Resistant Staphylococcus Aureus Infection in Mice. Journal of Parenter Enteral Nutrition. Vol. 17, No. 148-52.

Aggett, R.; Leach, J.L.; Rueda, R. and Maclean, W.C. (2002): Innovation in Infant Formula Development: A Reassessment of Ribonucleotides. Nutrition Journal, Vol. 19, No. 375-84.

Bhattacharjee, J.K. (1970): Microorganisms Potential Sources of food. Adv. Appl. Microbiol. Vol. 13., No. 139.

Cameron, A. (1999): Survey Tool Box for Livestock Diseases: A practical Manual and Software Package for Active Surveillance in Developing Countries. Australian Centre for International Agricultural Research. Australia.

Carter, H.E. and Phillips, G.E. (1944): The nutritive Value of yeast Protiaus. Fed. Proc. Vol.3, No.123.

Carver, J.D. and Walker, W.A. (1995): The role of Nucleotides in Human Nutrition. Natural Biochemical Journal, Vol. 6, No. 58-72.

Cruichshank, G. (2002): Gut microflora the key to healthy broiler growing. Poultry World, July, 14.

Dormitorio A, T.V.; J.J. Giambrone AC; K. Guo A. and D.J. Jackwood B. (2007): Molecular and Phenotypic Characterization of Infectious Bursal Disease Virus Isolates. Avian Diseases 51(2):597-600.

Erf, G.F. (2004): Cell-mediated immunity in poultry. PoultSci, 83:580-590.

Hirai, K. and Shimakura, S. (1974): f infectious bursal disease. virus Viral 14: 957-964. lsaacson,R.E. (eds.) Gastrointestinal microbiology No 2.P 537-587.Chapmanand Hall, New York.

Lee, L.H. and Lin, Y.P. (1992): Amonoclonal antibody capture enzyme – linked Immunosorbent assay for Detecting antibodies to infectious bursal disease virus. Journal of virological methods, 36: 13-23.

Mickolos, D.A.; Fewyer, G.A. and Crotty, D.A. (2003): DNA Science. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Publisher, John Inglis. USA.

Navarro, J.; Ruiz-Bravo, A.; Jimenz-Varela and M. Gil, A. (1996).Modulation of Antibody-Forming Cell and Mutagen- Driven Lymph proliferative Response by Dietary Nucleotide in Mice. Immunology Journal, Vol. 53, No. 141.

Onifade, A.A. and Babatunde, G.M. (1998): Comparison of the utilization of palm kernel meal, brewers’ dried grains and maize offal by broiler chicks. Br. Poult .Sci., 39: 245-250

Pick, E. and Mizel, D. (1981): Rapid Microassays for the Measurement of Superoxide and Hydrogen Peroxidase Production by Macrophages in Culture Using an Automatic Immunoassay Reader. Journal of Immanuel Methods, Vol: 46:211-26.

Statistics (1998): Analytical Softeware, Guideline manual, Version, 2.0. USA.

Stone, C. (1998): Yeast products in the feed industry. Ed. By Mills, d. Inc. Cedar Rapids, Iowa., p. 10-11.

Van Buren, C.T.; Klkarni, A.D.; Schandle, V.B. and Rudolph, F.B. (1983): The Influence of Dietary Nucleotides on Cell-Mediated Immunity. Transplantation Journal, Vol. 36, No. 350-2.

Wu, C.C. Dorairajan, T. and Lin, T.L. (2000): Effect of ascorbic acid supplementation on the immune response of chickens vaccinated and challenged with infectious bursal disease virus. Veterinary Immunology and Immunopathology, 74: 145-152.

Yadav, B.S.; Srivastava, R.K. and Shukla, P.K. (1994): Effect of supplementation of the broiler ration with live yeast culture onnutrient utilization and meat production. Indian Journal of Animal Nutrition, 11 (4): 225-227

Yalcin, S.; Onol, A.G.; Kocal, D. and Ozcan, I. (1993): The use of baker`s yeast as a protein source in broiler ration. Doga, Turk- Veterinerlik-ve-Hayvancilik-Dergisi,17 (4): 305-309.

Yamauchi, K.; Hales, N.W.; Robinson, S.M.; Niehoff, M.L.; Ramesh, V. and Pellis, N.R. (2002): Dietary Nucleotides Prevent Decrease in Cellular Immunity in Ground-Based Microgravity Analog. Journal of Applied Physiology.Vol. 93, No. 161-6.

Yamauchi, K.; Adjei, A.A.; Ameho, C.K.; Chan, Y.C. and Kulkarni, A.D. Sata. (1996): A nucleoside-Nucleotide Mixture and Its Components Increase Lymphoproliferative and Delayed Hypersensitivity Responses in Mice. Journal of Nutural, Vol. 126, No. 1571-7.

Zander, D.V. (1978): In Disease of Poultry (7 ed) Iowa State University Press. PP.3.