THE IMPACT OF PROBIOTIC ADDITIVE ON SOME CELL BLOOD COMPOSITION AND ON CHOLESTEROL IN LAMBS

THE IMPACT OF PROBIOTIC ADDITIVE ON SOME CELL BLOOD COMPOSITION AND ON CHOLESTEROL IN LAMBS

MOUSA AL HAMOUD; SHARIF SHAHIN and AHMED H. MOKRESH

Faculty of Veterinary Medicine, Albaath University.

Email: rosealhamod@yahoo.com

تأثير إضافة البروبيوتيک على بعض مکونات الدم الخلوية والکولسترول عند الحملان

موسى الحمود ، شريف شاهين ، أحمد حمدي مقرش

Email: rosealhamod@yahoo.com

أجري البحث لدراسة تأثير إضافة البروبيوتيک (البريمالاک) على بعض مکونات الدم الخلوية والکولسترول عند الحملان , حيث استخدم في هذه التجربة  (30)حملاً من حملان العواس السورية , متوسط وزن الواحد منها 32 ± 0.7)) وقد تم توزيعها على ثلاث مجموعات, ضّمت کل مجموعة  (10)حملان (الشاهد T0,T1T2,) , غذيت حملان المجموعات على علائق تقليدية , مع إضافة البروبيوتيک بمعدل2 غ باليوم للرأس للمجموعة T1 و4غ باليوم للرأس للمجموعة T2 ولمدة شهرين متتالين. تم سحب الدم من المجموعات في نهاية التجربة لأجراء التحاليل الدموية (RBC, WBC, DWBC, PCV, HB, Cholesterol).

أشارت نتائج البحث إلى حدوث تغيرات دموية وبيوکيميائية في المجموعات مقارنة بالشاهد الأمر الذي يعزز ويؤکد دور البروبيوتيک في تربية لحملان. وکانت النتائج زيادة في قيمة PCV, HB, Cholesterol,RBC)) مقارنة بالشاهد , ولکن لم تصل هذه الزيادة إلى مستوى المعنوية. ولم تتأثر (WBC, DWBC) بإضافة البروبيوتيک إلى عليقة الحملان. وانخفاض معنوي في ترکيز الکولسترول في مجموعات التجربة (T1,  (T2 مقارنة بالشاهد عند قيمة(p<0.05) .

INTRODUCTION

المقدمـة

يشهد العالم يوماً بعد يوم تقدماً هائلاً في التکنولوجيا عموماً والتقانة الحيوية خصوصاً ولاسيما في مجال الإنتاج الحيواني ، هذا الإنتاج الذي ينبغي علينا أن نطوره کماً وکيفاً ليلبي حاجات المستهلک وذوقه , ويعزز في نفس الوقت أمننا الغذائي ويحمي صحة المستهلک عندنا من احتمالات مرضية تنجم عن استهلاک هذه المنتجات. ولقد اعتادت بعض المؤسسات المشتغلة بتربية الحيوان وکذلک بعض الأفراد ولسنوات طويلة على أن تضيف الصادات الحيوية إلى العلائق الغذائية کمحسنات نموGP (Growth promoters) وکمثبطات لنمو العضيات الممرضة في الجسم وکمعززات للأداء الإنتــاجي وکواقيــات من الإصابــة ببعـض الأمــراض المعويــة لهذه الحيــوانات بغيــة تســريع نمـــوها ووقايتـها من الأمراض (Truscott and Alsheikhly, 1977). إلا أن الباحثين في هذا المجال اکتشفوا أن لهذه الصادات تأثير تراکمي على نوعية المنتج المعد للاستهلاک البشري والسبب في ذلک عائد إلى ثمالاتها ( (Residuesالمضرة وظهور أنواع من البکتيريا المقاومة للعديد من الصادات الحيوية في آن واحد (Philips,1999). ولذلک قامت منظمة الصحة العالمية باستصدار تعليمات ونصائح تمنع إضافة بعض الصادات الحيوية إلى العليقة الغذائية (Woodward, 2005).

يتأثر نمو الحملان وتطوره بالبنية الوراثية (El-Barody et al., 2002) والظــروف البيئيــة وبشــکل خــاص طريقــة التغذيــة ومعــززات النمـو  (Abd El-Gawad et al., 2002, Andrighetto et al., 1993)حيث تؤثر التغذية بشکل مفيد في إنتاج حملان تجارية من خلال إدخال المستنبتات الحية(live culture)  بشکل نسبي في غذاء الحملان والذي هو أمر عَصْرِيّ ومبشر بالنجاح (El-Barody et al., 2002) إن أحد أهم هذه المستنبتات (الإضافات الغذائية) ليس فقط لعليقة الأغنام وإنما لعلائق کل المجترات هي مرکبات البروبيوتيک DFM (Direct Fed Microbial), التي يتم استعمالها حديثاً کبدائل مناسبة Gibson and Fuller, 2000)) من أجل زيادة الإنتاج وتخفيض النفقات في تربية الحيوان وتتصف بقلة خطورتها وانعدام ثمالاتها وقدرتهاعلى أن تلعب دوراً محفزاً للنمو ومعيقاً لنمو العضيات الممرضة دون أن تتسبب في تکوين ذراري جرثومية مقاومة في جسم الکائن الحي (et al., 2007  .(Chichlowskiإحدى أهم هذه البدائل مرکبات البروبيوتيک (Probiotics) وهي مجموعة من الأحياء الميکروبية النافعة والتي تعمل على الحفاظ على التوازن المرغوب والمفضل للکائنات الحية المجهرية القاطنة في القناة الهضمية (Fuller, 1989). وقد تم اختيار مرکب من مرکبات البروبيوتيک وهو مرکب البريمالاک (Primalac^®) المتوفر في الأسواق وهو من إنتاج شرکة  (Star-Labs, USA)لرصد واستقصاء التأثيرات المحتملة له على نمو الحملان , وهو يحتوي على المکونات التالية:

• 1 x 10⁹ CFU/Gram =  Billion Organisms/g
• Lactobacillus acidophilus fermentation product dehydrated 2.5 x 10⁸ = 250,000,000
• Lactobacillus casei fermentation product dehydrated2.5 x 10⁸ = 250,000,000
• Bifidobacteriumbifidium fermentation product dehydrated2.5 x 10⁸ = 250,000,000
• Enterococcus faecium fermentation product dehydrated2.5 x 108 = 250,000,000
• Rice mill by product
• Calcium carbonate

لذلک فقد رأينا البحث في تأثير هذا المرکب (البروبيوتيک) على مکونات الدم الخلوية وعلى الکولسترول عند الحملان في ضوء وجوده وغيابه کون دراسته ضئيلة عند الحملان أو حتى في  المجترات الأخرى , ونظراً لکون الأغنام تشکل العماد الأساسي في ثروتنا الحيوانية , کما أن المستهلک عندنا يفضل لحمها على لحوم الحيوانات الأخرى الموجودة في القطر.

OBJECTIVES

أهداف البحث

­1- دراسة تأثير إضافة البروبيوتيک (البريمالاک) على مکونات الدم الخلوية

2- دراسة تأثير إضافة البروبيوتيک (البريمالاک) على الکولسترول عند الحملان

MATERIALS and METHODS

مواد وطرائق البحث

حيوانات التجربة

تم اختيار ثلاثين حملاً من حملان العواس السورية , بلغ متوسط وزن الواحد منها 32±0.7 kg)) في مزرعة خاصة في قرية معرشحور التابعة لمحافظة حماه ثم وزعت الحملان على ثلاث مجموعات (الشاهد (T2, T1, T0 وقد تضمنت کل مجموعة عشرة حملان.

التغذية

تمت تغذية حملان التجربة على عليقة معتادة للتسمين الجدول رقم (1) کما تم تجريع حملان التجربة مرکب البريمالاک العلفي الذي تم وضعه ضمن کبسولات بمقدار 2g)) للمجموعة (T1) و4g)) للمجموعة (T2) الشکل (1 , 2) يوضحان نموذجاً لهذه الکبسولات يومياً في الصباح لضمان وصول المرکب إلى کل حيوان من حيوانات المجموعة الواحدة وبالجرعة المطلوبة حسب خطة التجربة الموضحة في الجدول رقم(2).

                                  شکل رقم 1: نموذج للکبسولات                                   شکل رقم 2: نموذج للکبسولات

                        المعطاة للمجموعة T1المحتوية g2 بريمالاک                   المعطاة للمجموعةT2  المحتوية g4 بريمالاک

جدول 1: مواد العلف الأولية المستعملة في ترکيب العليقة الأساسية للتجربة.%

جدول2:مجموعات التجربة ووزن جرعة البريمالاک المضافة يومياً.

جمع عينات الدم والتحاليل المجراة عليها

من أجل دراسة مکونات الدم الخلوية عند حيوانات التجربة, تم سحب الدم من الوريد الوداجي في نهاية التجربة , التي استمرت شهرين بسيرنغ قياس 5 مل بعد تعقيم مکان السحب ، وبعد ذلک تم وضع  2 مل من الدم المسحوب في أنبوب سعة  2.5مل يحتوي على مانع تخثر هو((EDTA من أجل دراسة مکونات الدم الخلوية و3 مل في أنبوب زجاجي معقم وخالي من الهواء لا يحتوي على مانع تخثر من اجل الحصول على مصل الدم من أجل دراسة الکولسترول (Cholesterol)

• تم تقدير قيمة PCV %)) بطريقة الأنابيب الشعريةMicrohematocrit – method  باستخدام أنابيب دقيقة طولها 75ملم وقطرها/1/ ملم ومفتوحة الطرفين وخالية من أي مادة مانعة للتخثر.
•  تم تقدير التعداد الکلي للکريات الدموية الحمراء  RBCوالبيضاء WBC بطريقة العد التقليدية وباستخدام عدادة نيوباور المعدلة.
• تم معايرة الخضاب الدموي  HBباستخدام مجموعة جاهزة (Kits) من صنع شرکة Biosystem وباستخدام جهاز Spectrophytometer BTS-310 من صنع شرکة Bio-system.
•  تم تحضير فيلم دموي بطريقة الشريحتين لمعرفة الصيغة التفريقية لکريات الدم البيضاءtotal anddifferental leukocytes countDWBC)) ومن ثم تم صباغة الفلم الدموي المحضر بواسطة صبغة جيمزا.
• ·     تم معايرة الکولسترول  Cholesterolباستخدام مجموعة کيت جاهزة وحسب توصيات الشرکة المصنعة (Human) وباستخدام جهاز Spectophotometer

التحليل الإحصائي:Statistical analysis

للتحليل الإحصائي للمعطيات تم استخدام برنامج حاسوبي من نوع (SPSS14.0) حيث قمنا بتحليل التباين لمعيار واحد (One Way ANOVA). وذلک للتقصي عن وجود فروق معنوية في قيم المتوسطات الحسابية للمعطيات الرقمية التي تمخضت عنها التجربة.

RESULTS

النتائج

بينت النتائج أن إضافة البروبيوتيک (البريمالاک) إلى العليقة أفضت إلى إحداث تغيرات في تراکيز بعض المکونات الخلوية للدم ولکن بصورة غير معنوية. أما بالنسبة للکولسترول فقد أظهرت نتائجنا وجود انخفاض معنوي جداً (P<0.01) في قيمته حيث بلغ ترکيزه في المجموعة ((T1=60.60 mg/dl  والمجموعة (mg/dl (T2=79 بالمقارنة مع مجموعة الشاهد (84.40mg/dl). کما هو موضح بالجدول رقم (3) والجدول رقم (4).

جدول رقم 3: تأثير البريمالاک على مکونات الدم الخلوية والکولسترول عند الحملان.

• وجود فرق معنوي عند قيمة p<0.05)) عند وجود الأحرف a,b بشکل مختلف في الصف الواحد.
• وجود فرق معنوي جدا عند قيمةp<0.01) ) عند وجود الأحرفA,B  بشکل مختلف في الصف الواحد.

جدول رقم 4: تأثير إضافة البريمالاک على الصيغة التفريقية للکريات البيض عند الحملان.

DISCUSSION

المناقشة

الصورة الدموية مؤشر هام على صحة الحيوان (Cheesborough, 1991) وقد وجد أن صورة الدم تتأثر بواسطة المصادر المختلفة من البروبيوتيک  (Aboderin and Oyetayo 2006)إن إضافة البروبيوتيک (البريمالاک) إلى عليقه الحملان أدت إلى زيادة في قيم (RBC, PCV ,HB) ولکن هذه الزيادة لم تصل إلى مستوى المعنوية وهذا يناقض ماذکره (Sayed, 2003) بأن إضافة البروبيوتيک إلى عليقة الجدايا لها تأثير معنوي على قيم (RBC , PCV , HB). وتتوافق مع ماذکره الباحث (Morrill et al., 1995) بأن إضافة البروبيوتيک لغذاء العجول لم يکن لها أي تأثير معنوي على تعداد کريات الدم الحمراء والبيضاء وتتوافق أيضاً مع (Sadiek and Boehm, 2001) اللذان وجدا النتيجة نفسها عند إضافة البروبيوتيک لغذاء الأغنام.

أما بالنسبة إلى کريات الدم البيضاء والصيغة التفريقية لها والهيموغلوبين فلم تتأثر بإضافة البروبيوتيک بالجرعتين (2g ,4g) بالمقارنة مع مجموعة الشاهد  T0وهذا يتوافق مع ما أخبره (Galip, 2006) الذي ذکر بأنه لا يوجد اختلافات في قيم الهيموغلوبين Hb الخلايا القاعدية basophils, الحمضات  eosinphils, ووحيدات النوى  monocytes بين الشاهد والمجموعة التي أضيف إلى عليقتها الخميرة.

ويتوافق مع کلاً من  (Aboderin and Oyetayo, 2006)حيث وجدا بأن وحيدات النوى  monocytesوالخلايا القاعدية basophils والهيموغلوبين  hemoglobinلم تتأثر بالمستويات المختلفة من البروبيوتيک بالمقارنة مع مجموعة الشاهدT0.

أما بالنسبة للخلايا اللمفاوية فقد ازدادت بالمقارنة مع مجموعة الشاهد ولکن أيضاً لم تصل هذه الزيادة إلى مستوى المعنوية ، وهذا يتناقض مع (Belewu et al., 2008). وکذلک أشارت نتائجنا الى وجود انخفاض معنوي في ترکيز الکولسترول في المجموعتين المضاف اليهما البروبيوتيک T2=79mg/dl, T1=60.60mg/dl)) بالمقارنــــة مـــع مجموعـــة الشاهــــد 84.40mg/dl)) وهذا مــا يوافــــق کــــلاً مــن البـــاحثيــن (Alp, and Kahraman, 1996, Lubbadeh et al., 1999). ويعزى انخفاض ترکيز الکولسترول في مجموعات التجربة مقارنة مع مجموعة الشاهد إلى انخفاض امتصاص الدهن (lipid) من الأمعاء بواسطةDeconjugation  وبالتالي ربما هذا ما أدى إلى انخفاض کولسترول الدم. وربما تفکيک عصارة المرارة في الأمعاء ، وبالتالي منع إعادة الامتصاص للکوليسترول.

ولکن يجب الاعتراف بأن العثور على الاَليات الفعالة التي تؤدي إلى خفض کوليسترول الدم تحت تأثير إضافة البريمالاک إلى العليقة , يحتاج إلى أبحاث رصينة أخرى ترکز على هذا الموضوع.

CONCLUSIONS and RECOMMENDATIONS

الاستنتاجات والتوصيات

-    أثبتت نتائج هذه التجربة أن إضافة مرکب البريمالاک إلى عليقة الحملان أفضت إلى انخفاض الکوليسترول في المجموعتين (T1 , T2) بالمقارنة مع مجموعة الشاهد (T0).

-    إن المجموعات المضافة إلى عليقتها البريمالاک لم تحتاج إلى الصادات الحيوية خلال فترة التجربة وهذا يؤمن للمستهلک منتجاً (لحماً) صحياً خال من الثمالات الدوائية التي يحمل وجودها في الجسم مخاطر لا تحمد عقباها.

-    نوصي بأن تخضع أمثال هذه المرکبات لمزيد من الاستقصاءات التي تستهدف الکشف عن آلية عمل هذه المرکبات وکذلک معرفة ذروة حدودها المحسنة للإنتاج وتأثيراتها الجانبية في حال وجودها.

-    نوصي أيضاً بدراسة تأثير هذا المرکب على المناعة النوعية (الجلوبيولينات المناعية) عند الحملان.

REFERENCES

المراجــع

Abd El-Gawad, Eman, I.; Maharm, G.M.; Faten, F. Abou Ammo and Fathia A. Ibrahim. (2002): Effect of yeast culture (Lacto-Sacc) supplementation on growth, some blood parameters and carcass quality of goats. Egypt. J. Appl. Sci., 17 (7): 375-388.

Aboderin, F.I. and Oyetayo, V.O. (2006): Haematological Studies of Rats Fed Different doses of Probiotics, Lactobacillus plantarum, Isolated from Fermenting Co Slurry. Pak. J. Nutr. 5(2): 102-105.

Alp, M. and Kahraman, R. (1996): Utilization of probiotics in animal nutrition. Istanbul Üniv. Vet. Fak. Derg., 22: 1-8.

Andrighetto, J.; Bailoni, L.; Cozzi, G. and Berzaghi, P. (1993): Effect of yeast culture addition on digestion in sheep fed a highconcentrated diet. Small ruminant research.12.27-34.

Belewu, M.A.; Yahaya, A.A. and Adeyina, A.O. (2008): Study on some haematological parameters of goats fed aspergillus treated and untreated shea-butter cake. Rev. J. Anim. Sci. 2(5): 154-156.

Cheesborough, M. (1991): Medical laboratory manual for tropical countries. 2nd edition Tropical Health Technology and Butterworth Scientific limited. 1: 494-526.

Chichlowski, M., Croom, J.; McBride, B.W.; Havenstien, G.B. and Koci, M.D. (2007): Metabolic and physiological impact of Probiotics or direct –fed microbes on poultry: A brief review of current knowledge. Int. J. Poult. Sci. 6(10): 694-704.

El-Barody, M.A.A.; Abdalla, E.B. and Abd El-Hakim, A.A. (2002): The changes in some blood metabolites associated with the physiological responses in sheep. Livestock Prod. Sci., 75: 45-50.

El-Shamaa, I.S. (2002): Onset of puberty, semen production and blood constituents in crossbred male lambs as affected by dietaryyeast culture addition. J. Agric. Sci. Mansoura Univ., 27(7): 4589-4598.

Fuller, R. (1989): Probiotics in man and animals. J. Appl. acterial., 66: 365-378. 

Galip, N. (2006): Effect of supplemental yeast culture and sodium bicarbonate on ruminal fermentation and blood variables in rams. J. Anim. Phys. and Anim. Nutri. 90: 446-452.

Gibson, G.R. and Fuller, R. (2000): Aspects of in vitro and in vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use. J. Nutr., 130: 391-395.

Lubbadeh, W.; Haddadin, M.S.Y.; Al-Tamimi, M.A. and Robinson, R.K. (1999): Effect on cholesterol contentof fresh lamb of supplementing the feed of Awassiewes and lambs with Lactobacillus acidophilus. Meat Sci., 52: 381-385.

Morrill, J.L.; Morrill, J.M.; Feyerherm, A.M. and Laster, J.F. (1995): Plasma proteins and a probiotic as ingredients in milk replacer. J. Dairy Sci. 78: 902-907.

Philips, I. (1999): Assessing in the evidence that antibiotics growth promoters influence human infection. J. Hospital Infections,43: 173-178

Sadiek, A. and Boehm, J. (2001): Influence of pronifer as a probiotic on the rumen fluid and blood parameters of sheep fed different roughage concentrate based diets. Wiener Tieraztliche Monatscshrift, 88: 4-10.

Sayed, A.S. (2003): Studies of the influence of pronifer as a probiotics on the clinical, hematological and biochemical status of the goat’s kids. Assiut. Vet. Med, J. 99(98): 131-143.

Truscott, R.B. and Alsheikhly, F. (1977): The production and treatment of necrotic enteritis in broilers. AM. J. Vet. Res. 38: 857-861.

Woodward, P. (2005): Impact of a ban on animal by- products and antibiotic growth promoters – European experience. Page 46-57. In: Proceeding, Thirty second annual Carolina Poultry Nutrition Conference, North Carolina, October, 26-27.