USING POLYMERASE CHAIN REACTION IN DIRECT DETECTION OF MYCOPLASAMA GALLISEPTICUM AND MYCOPLASMA SYNOVIAE INFECTIONS IN BROILER BREEDER FLOCKS IN HAMA PROVINCE IN SYRIA

USING POLYMERASE CHAIN REACTION IN DIRECT DETECTION OF MYCOPLASAMA GALLISEPTICUM AND MYCOPLASMA SYNOVIAE INFECTIONS IN BROILER BREEDER FLOCKS IN HAMA PROVINCE IN SYRIA

H. ALREFAIE^* and S. IBRAHIM^**

^* PhD student, Faculty of Vet Medicine, Albaath Univ, Hama, Syria.

^**Assistant professor of Microbiology Department, Faculty of Vet Medicine, Albaath Univ, Hama, Syria.

Email: hamid77ali@hotmail.com and hamid77ali@yahoo.com

استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل في الکشف المباشر عن إصابات المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزليلية عند قطعان أمات دجاج اللحم في محافظة حماة في سورية.

حميد الرفاعي ، سامر إبراهيم

تعتبر المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزليلية ممرضات طيرية هامة تسبب أمراضاً تنفسيةً عند قطعان الدواجن، وينتج عنها خسائر اقتصادية کبيرة في صناعة الدواجن في سورية ومعظم أنحاء العالم. لذا فقد هدفت هذه الدراسة إلى استخدام تفاعل البلمرة المتسلسل المتعدد في الکشف المباشر عن الإصابة التنفسية المسببة بهذه الأنواع عند قطعان أمهات دجاج اللحم في محافظة حماة من سورية. لهذا الغرض تم جمع 203 مسحة رغامية من طيور تنتمي لـ29 قطيعاً تعاني من أعراض تنفسية وذلک خلال الفترة الممتدة بين أيار 2011 وأيار 2012. أظهرت نتائج هذه الدراسة أن 27 قطيعاً (93%) کان مصاباً بهذين النوعين من المايکوبلازما (16 إصابة مختلطة، 11 إصابة مفردة). وبلغ عدد القطعان المصابة بالمايکوبلازما الانتانية الدجاجية 25 قطيعاُ وبلغ  معدل انتشار الإصابة عند هذه القطعان بهذا النوع 86%، بينما بلغ عدد القطعان المصابة بالمايکوبلازما الزليلية 18 قطيعاً ومعدل انتشار الإصابة 62%. وبغض النظر عن القطعان التي تنتمي إليها العينات المدروسة فقد أظهرت نتائج هذه الدراسة بأن 128 طيراً (63%) کان مصاباً بکلا النوعين (66 إصابة مختلطة و64 إصابة مفردة)، وبلغ عدد الطيور المصابة بالمايکوبلازما الانتانية الدجاجية 119 طيراً وبلغ انتشار المايکوبلازما الانتانية الدجاجية بين الطيور المدروسة (59%) کما أظهرت النتائج أن 75 طيراً مصاباً بالمايکوبلازما الزليلية، وانتشار المايکوبلازما الزليلية بين طيور الدراسة (37%).

الکلمات المفتاحية: تفاعل البلمرة المتسلسل المتعدد، الکشف المباشر، المايکوبلازما الانتانية الدجاجية، المايکوبلازما الزليلية، قطعان دجاج التربية (أمهات دجاج اللحم).

INTRODUCTION

المقدمــة

يعتبر داء المايکوبلازما مرضا ً تنفسياً معدياً يصيب الدجاج وطيور الرومي وتسببه العديد من أنواع المايکوبلازما الممرضة ومن أهمها المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية (OIE, 2008). تسبب المايکوبلازما الانتانية الدجاجية المرض التنفسي المزمن  chronic respiratory disease (CRD)عند الدواجن الأهلية وبشکل خاص في الظروف الإدارية السيئة مثل التعرض للإجهاد أو وجود ممرضات تنفسية أخرى (Bradbury, 2001). يتصف المرض بالزکام والتهاب الملتحمة، عطاس والتهاب الجيوب وبشکل خاص عند طيور الرومي. يمکن أن يسبب المرض خسائر کبيرة في الإنتاج وتدني في جودة لحم الطيور المصابة وانخفاض في إنتاج البيض.(Kleven, 2003; Ley, 2003; OIE, 2008) تحدث معظم إصابات المايکوبلازما الزلالية على شکل إصابة تنفسية علوية تحت سريرية وقد تسبب آفات في الأکياس الهوائية عندما تتعقد الإصابة  مع مرض النيوکاسل  Newcastle disease (ND) ، أوالتهاب القصبات المعدي  infectious bronchitis (IB) أو کليهما معاً، ويمکن أن تسبب المايکوبلازما الزلالية المرض التنفسي والتهاب الأغشية الزلالية عند قطعان الدجاج التجارية أو يمکنها أن تسبب عدوى کامنة .(Kleven, 2003; Ley, 2003; OIE, 2008) توجد طرق مختلفة لتشخيص داء المايکوبلازما مثل الاختبارات المصلية التي تکشف عن الأضداد النوعية للمفطورات المسببة للمرض ولکن يوجد بعض المساوئ والعيوب للطرق المصلية من أهمها النتائج الايجابية الکاذبة والتفاعلات التصالبية بين الأنواع  المختلفة للمفطورات (Yamamoto, 1991; Yoder, 1991; Kempf, 1998).  ويتم تأکيد نتائج الاختبارات المصلية من خلال عزل العامل المسبب على الأوساط الزرعية وتعتبر تقنيات الزرع والعزل مجهدة، ومکلفة وتتطلب ظروف تعقيم عالية (Fan et al., 1995; Kempf, 1998). مؤخراً، استبدلت هذه التقنيات بتقنية اختبار تفاعل البلمرة المتسلسلpolymerase chain reaction (PCR)  لتشخيص داء المايکوبلازما حيث يمکن إجراء اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل على العينات السريرية بدون الحاجة لعزل العامل المسبب ونظراً لما تتميز به هذه التقانة من حساسية عالية وسرعة في الانجاز کل ذلک جعلها أکثر استعمالاً للکشف ومراقبة إصابة المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية (Garcia et al., 2005; Gharaibeh and Al Roussan, 2008). ويمکن من خلال هذه التقانة الکشف عن الحمض النووي لأکثر من نوع من أنواع المايکوبلازما بواسطة اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل المتعدد وتشخيص إصابات المايکوبلازما عند قطعان الدجاج التجاري (Wang et al., 1997; Buim et al., 2009). ونظراً لانتشار إصابات المايکوبلازما بين قطعان الدجاج في سورية وما تسببه من خسائر اقتصادية وصعوبة التشخيص الحقلي المعتمد على الأعراض السريرية نظراً لتشابهها مع أعراض أمراض أخرى وأهمية التشخيص المبکر لداء المايکوبلازما فقد هدفت هذه الدراسة إلى الکشف عن إصابات المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية عند قطعان أمات دجاج اللحم في محافظة حماة في سورية من العينات مباشرة باستعمال مشرعات نوعية للمايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية.

MATERIALS and METHODS

المواد والطرائق

أجريت هذه الدراسة في الفترة الممتدة بين مايو 2011 ومايو 2012 على 29 قطيع أمهات دجاج لحم کانت تعاني من أعراض تنفسية من مناطق مختلفة من محافظة حماة في سورية.

جمع العيناتsampling :

جمعت 203 عينة من جميع قطعان الدراسة بواقع 7 عينات من کل قطيع حيث تم أخذ العينات على شکل مسحات رغامية من خلال فتح الرغامى وحک أو فرک الماسحة القطنية المعقمة بالغشاء المخاطي لجدار الرغامي للحصول على إفرازات مخاطية أو خلايا ظهارية تحتوي على العامل المسبب بحسب (Buim et al., 2009) وضعت کل عينة في أنبوب يحوي على3 مل من الدارئة الفوسفاتية المعقمة ذات أس هيدروجيني 7.2 PBS (pH 7.2) وفقاً لـ (Gharaibeh and Al Roussan, 2008) ووضعت العينات في حافظة ثلجية ونقلت إلى مخبر الأحياء الدقيقة في کلية الطب البيطري.

استخلاص مرصاف الدنا DNA extraction :

استخلص مرصاف الدنا وفقاً للطريقة الموصوفة من قبل (Liu et al., 2001)

بشکل مختصر، بعد عصر الماسحة على جدار الأنبوب تم أخذ 1 مل من العينة طردت مرکزياً على سرعة 13,000g لمدة 10 دقائق. بعد ذلک غسلت الخلايا المترسبة مرتين بـ 1مل من محلول الدارئة الفوسفاتية (PBS) (pH 7.2) وتم تحضير معلق بإضافة 50ميکرولتر من الماء المقطر المعقم إلى الراسب. سخن المعلق الخلوي في حمام مائي على درجة 100مْ لمدة 10 دقائق، بعد ذلک وضعت العينات بسرعة في المجمد لمدة 10 دقائق. طرد المعلق مرکزياً بالمثفلة بسرعة 13000g  لمدة 10 دقائق. جمع السائل الطافي المحتوي على الحمض النووي وخزن بدرجة -20مْ لحين الاستعمال.

إجراء تفاعل البلمرة المتسلسل المتعدد Multiplex PCR:

تم استخدام مشرعات نوعية للمايکوبلازما الانتانية الدجاجية والزلالية من إنتاج شرکةEurofins MWG Operon,Germany) ويوضح الجدول رقم (1) تسلسل هذه المشرعات

الجدول 1: تسلسل المشرعات المستعملة في تفاعل البوليميريز المتسلسل المتعدد وحجم المنتجات.

  f = forward, r = reverse.

کما استعملت عتيدة خاصة بتفاعل البولميريز من إنتاج شرکة کياجن PCR core kit( QIAGEN, Germany) أجري الاختبار وفقاً لـ (OIE,2008) حيث حضر مزيج التفاعل بحجم 50 ميکرولتر في مکان نظيف ومعزول وباستعمال ماصات ورؤس ماصات معقمة کما يلي:

10 × PCR Buffer                5.00 μlدارئة الاختبار     

dNTP(l0 mM)                      1.00 μl مزيج القواعد الآزوتية

MGF (20 pmole/μl)      0.50 μlالمشرع الصاعد للمايکوبلازما الانتانية الدجاجية

MGR (20 pmole/μl)      0.50 μlالمشرع الهابط للمايکوبلازما الانتانية الدجاجية

MS F (20 pmole/μl)      0.50 μlالمشرع الصاعد للمايکوبلازما الزلالية

MS R (20 pmole/μl)      0.50 μlالمشرع الهابط للمايکوبلازما الزلالية

Taq (5 U/μl)                         0.25 μlانزيم البلمرة لحمض دنا

کلوريد المغنزيزمMgCl₂                                                         2.00 μl

H2O Ultra-pure                34.75 μlماء نقي معقم وخالي من الدنا    

مرصاف الدنا Template DNA                          5.00 μl

وتم استخدام شاهد سلبي وشاهد ايجابي مع کل مجموعة مختبرة بعد ذلک تم وضع الأنابيب في المدور الحراري Termocycler ((TechNE TC- 512 وتم تشغيل الجهاز بعد إعداد  البرنامج الخاص بتضخيم المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والزلالية وفقاً لـ (OIE, 2008).

الجدول رقم 2: برنامج المدور الحراري للکشف عن المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية

تم الکشف عن نواتج تفاعل البلمرة المتسلسل بالرحلان الکهربائي في هلامة الأغاروز 2% (Peq gold universal No. 2) والمضاف له صبغة الإثيديوم برومايد بترکيز 1 ميکروغرام/مل في دارئة TBE(Tris borate EDTA) من شرکة تاکارا. بعد الرحلان لمدة ساعة وجهد کهربائي ثابت 100 فولت, نقلت هلامة الأجاروز الى نظام التظهير بالأشعة فوق البنفسجية ( (UVipro Platinumالمزود بکاميرة فيديو ومرشحة خاصة بالأشعة فوق البنفسجية وموصلة بجهاز کمبيوتر وطابعة حرارية. وفحصت الصور من اجل وجود أنطقة دنا (DNA Band) ذات حجم 207 قاعدة آزوتية للمايکوبلازما الزلالية و185 قاعدة أزوتية للمايکوبلازما الانتانية الدجاجية وذلک مقارنةً مع معلم الوزن الجزيئي (100 bp DNA Ladder, PeqLab).

RESULTS

النتائـــج

أظهرت نتائج اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل المتعدد المستخدم في هذه الدراسة في الکشف عن المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية عند أمات دجاج اللحم في محافظة حماة أن 128 عينةً (63%) من أصل 203 عينات أخذت من طيور تعاني من أعراض تنفسية حددت على أنها مصابة بهذين النوعين من المايکوبلازما ( بعضها إصابة بنوع واحد والبعض بالنوعين معاً)، حيث أظهرت نتائج الاختبار أن عدد العينات التي تم تحديد المايکوبلازما الانتانية الدجاجية بشکل مفرد بلغ 53 عينة (26%) بينما بلغ عدد العينات المحددة فيها المايکوبلازما الزلالية بشکل مفرد 9 عينات (4%)، وعدد العينات المحدد فيها العدوى المختلطة بالمايکوبلازما الزلالية والمايکوبلازما الانتانية الدجاجية معاً بلغ  66 عينة (33%)، وکان مجموع الطيور المصابة بالمايکوبلازما الانتانية الدجاجية 119 طيراً (عدوى مفردة وعدوى مختلطة) وبلغ انتشار الإصابة بين الطيور المدروسة 59% وعدد الطيور المصابة بالمايکوبلازما الزلالية 75 طيراً (إصابة مفردة ومختلطة) وبلغ انتشار الإصابة بالمايکوبلازما عند طيور الدراسة 37%. في حين أظهرت النتائج أن عدد القطعان المصابة بهذين النوعين من المايکوبلازما بلغ 27 قطيعاً (93%) (إصابة مفردة ومختلطة) من أصل 29 قطيعاً جمعت منها العينات،  حيث کان 25 قطيعاً مصاباً بالمايکوبلازما الانتانية الدجاجية وبلغ معدل انتشار الإصابة بالمايکوبلازما الانتانية الدجاجية 86%  و کما أظهرت النتائج أن عدد القطعان المصابة بالمايکوبلازما الزلالية 18 قطيعاً وانتشارها بين القطعان بلغ 62%ً.  والجدول رقم (3) و(4) يوضح النتائج بالتفصيل وتوضح الصورة رقم (1)،(2)،(3) نتائج الاختبار للکشف عن المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية.

الجدول رقم 3 : نتائج اختبار PCR لانتشار المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية في العينات المأخوذة من أمات دجاج اللحم في محافظة حماة خلال الفترة الممتدة بين مايو 2011 ومايو 2012.

الجدول رقم 4 : نتائج اختبار PCR لانتشار المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية في قطعان أمات دجاج اللحم في محافظة حماة خلال الفترة الممتدة بين مايو 2011 ومايو 2012.

الصورة رقم 1: نتائج الفحص المباشر للمسحات الرغامية للطيور المشتبهة باستخدام اختبار الـPCR المتعدد، يشير العمود M إلى معلم الوزن الجزئي 100 bp DNA Ladder)), يشير العمود 1 إلى الشاهد السلبي، يشير العمود 2 إلى الشاهد الإيجابي، يشير العمود 3 والأعمدة 5-10 إلى إصابة مختلطة بالمايکوبلازما الزلالية والمايکوبلازما الانتانية الدجاجية والعمود رقم 4 نتيجة سلبية.

الصورة رقم 2: نتائج اختبار الـPCR المتعدد حيث يشير العمود M إلى معلم الوزن الجزئي100 bp DNA Ladder)), يشير العمود 1 إلى الشاهد الإيجابي للـ MG(185bp) والعمود 2 شاهد سلبي ، العمود 3 نتيجة سلبية ، تشير الأعمدة 4-6 إصابة مفردة بـ MG وتشير الأعمدة 7-9 إلى إصابة مختلطة بـ MS,MG.

الصورة رقم 3: نتائج اختبار الـPCR للمسحات الرغامية للطيور المشتبهة، يشير العمودM  إلى معلم الوزن الجزئي 100 bp DNA Ladder)), العمود 1 يشير إلى الشاهد الايجابي وتشير الأعمدة 2-10 إلى الإصابة بـ MS(207 bp) والعمود 11 يشير إلى الشاهد السلبي.

DISCUSSION

المناقشة

تعتبر المايکوبلازما (المفطورات) وخصوصاً المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية ممرضات طيرية هامة تسبب أمراضاً تنفسيةً ومفصليةً عند قطعان الدجاج التجارية، وينتج عنها خســـائر اقتصاديــة کبيرة في صناعــة الدواجن في معظم أنحاء العالم (OIE, 2008; Buim et al., 2009). عادة يتم تشخيص الإصابات التي تسببها المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية بطرق مختلفة منها الکشف عن الأضداد النوعية للمايکوبلازما المسببة للإصابة باستخدام الاختبارات المصلية مثل اختبار التراص السريع على الصفيحة واختبار منع التلازن الدموي واختبار الأليزا (Kempf, 1998; OIE, 2008)، يتم الرجوع إلى زرع وعزل المايکوبلازما واختبار PCR لتأکيد التشخيص المصلي (Kleven, 1997; OEI, 2008) ولکن زرع وعزل المايکوبلازما يستغرق وقتاً طويلاً, علاوة على أنه يکون غير مجدٍ أحياناً بسبب النمو الغزير للجراثيم االملوثة أو بسبب وجود عوامل تمنع نمو المايکوبلازما مثل المعالجة بالمضادات الحيوية (Kempf et al., 1997; Salisch et al., 1998; Mekkes and Feberwee, 2005)، کما أن الاختبارات المصلية يمکن أن تکون مرتبطة بإصابات متقدمة ويمکن حدوث تفاعلات تصالبية ولانوعيــة مع أنواع أخرى من المايکوبلازما غير الممرضة مما يؤدي إلى الحصول على نتائج ايجابية کاذبة لتشخيص الإصابــة (Kleven et al., 1996; Kempf et al., 1997). تتميز تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل PCR بحساسية عالية وسرعة في الانجاز کل ذلک جعلها أکثر استعمالاً للکشف ومراقبة إصابة المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية (Garcia et al., 2005; Gharaibeh and Roussan, 2008). ويمکن من خلال هذه التقنية الکشف عن الحمض النووي  لأکثر من نوع من أنواع المايکوبلازما بواسطة اختبار PCR المتعدد وتشخيص إصابات المايکوبلازما عند قطعان الدجاج التجاري (Wang et al., 1997; Buim et al., 2009). لذا فقد هفت هذه الدراسة إلى استخدام اختبار PCR في الکشف المباشر عن إصابات المايکوبلازما الانتانية الدجاجية والزلالية عند أمات دجاج اللحم في محافظة حماة من سورية لما تسببه من خسائر اقتصادية وخطورة انتقالها الى نسل هذه القطعان.

أشارت نتائج هذه الدراسة إلى انتشار مرتفع للمايکوبلازما (الانتانية الدجاجية والزلالية) في القطعان التى تم فحصها وبنسبة 93%، مع سيادة المايکوبلازما الانتانية الدجاجية فقد بلغ انتشارها بين القطعان 86% بينما بلغ انتشار المايکوبلازما الزلالية 62% في قطعان أمات دجاج اللحم التي تعاني من مشاکل تنفسية. ووفقاً لنتائج هذه الدراسة على العينات، وبدون الاهتمام بالقطيع التي تنتمي إليها طيور الدراسة ، فإن وجود المايکوبلازما ، قد برهن أو أکد بحدوث عالٍ : 63% ووفقاً لنتائج هذه الدراسة على القطعان وعلى طيور الدراسة فقد أشارت هذه النتائج إلى أن المايکوبلازما تنتشر بشکل واسع بين طيور وقطعان أمات دجاج اللحم التى تم فحصها. مما سبق يمکن تفسير الانتشار المرتفع لداء المايکوبلازما بين قطعان وطيور الدراسة إلى الانتقال الأفقي للمايکوبلازما الانتانية الدجاجية والمايکوبلازما الزلالية بين الطيور لنفس القطيع. وإذا أخذنا بعين الاعتبار خصائص الانتشار أو الانتقال العمودي للمرض والمصرح به سابقاً من قبل .(Christensen et al., 1994; Bradbury, 2001) فإن الانتشار المرتفع للمايکوبلازما في قطعان أمات دجاج اللحم يمکن أن يکون بسبب الطرح أو النشر المستمر للمسبب في مزارع الدواجن التجارية التي تتسلم الصيصان أو الکتاکيت، مما يؤدي إلى انتشار المرض وترتفع الخسائر الاقتصادية. إضافة إلى عوامل أخرى مساعدة ومهيئة للمرض والمتضمنة مقاومة المضادات الجرثومية من قبل العامل المسبب وآلية تملص المايکوبلازما من الجهاز المناعي للمضيف. حيث يمکن أن تبقى المايکوبلازما لفترات طويلة في الطيور المصابة، مما يؤدي إلى إصابة قطعان جديدة قادمة إلى المزارع (Buim et al., 2009).

وعند مقارنة نتائج هذه الدراسة مع نتائج الدراسات المنشورة والتي أجريت على قطعان الدجاج التجارية نجد أن انتشار داء المفطورات في هذه الدراسة کان مرتفعاً فقد بلغ 93% مع سيادة المايکوبلازما الانتانية الدجاجية حيث بلغ انتشارها عند قطعان الدراسة 86% وقد کانت هذه النسبة أعلى مما توصل إليه (Buim et al., 2009) فقد ذکروا بأن انتشار الإصابة بالمفطورة الزلالية والمايکوبلازما الانتانية الدجاجية في نتائج دراستهم بلغ 72.72% مع سيادة المايکوبلازما الزلالية (60.6%) وهذه النتيجة متقاربة مع انتشار المايکوبلازما الزلالية عند القطعان في هذه الدراسة حيث بلغ 62%.

کما أظهرت نتائج هذه الدراسة بأن انتشار المايکوبلازما الانتانية الدجاجية عند القطعان التى تم فحصها بلغ 86% هو أعلى  مما توصل إليه (Kahya et al., 2010)  حيث ذکروا بأن انتشار المايکوبلازما الانتانية الدجاجية في نتائج دراستهم  بلغ 29%  وقد يکون السبب في ذلک هو تطبيق طرق وقائية عند القطعان التى تم فحصها لديهم مثل استخدام التحصين والتشخيص المبکر للمرض والتخلص من القطعان المصابة بينما لم تطبق مثل هذه الإجراءات في قطعان هذه الدراسة وغالباً يتم تشخيص الإصابات عند قطعان دجاج التربية بشکل متأخروتقتصر الإجراءات المطبقة على المعالجة بالمضادات الحيوية.

وإذا قارنا انتشار الإصابة بالمايکوبلازما الزلالية والمايکوبلازما الانتانية الدجاجية بالنسبة لعينات الدراسة أو طيور الدراسة بغض النظر عن القطعان التي تنتمي إليها العينات فقد بلغ 59% و 37% على التوالي نجد أن هذه النتيجــة کانت قريبــة إلى حدٍ ما مع ما توصل إليه ((Roussan et al., 2011 في نتائج دراستهم لتحديد نسبة انتشار الإصابة بالمايکوبلازما الزلالية عند قطعان دجاج اللحم باستخدام PCR في الأردن فقد بلغت لديهم 40%. وکان انتشار المايکوبلازما في نتيجة هذه الدراسة على مستوى العينات أعلى مما توصل إليه (Pourbakhsh et al., 2010)  في نتائج دراستهم التي أجروها في محافظة طهران في إيران لکشف الإصابة بالمايکوبلازما الزلالية في مزارع دجاج اللحم فقد بلغت نسبة الإصابة لديهم 25.7%. کما کان انتشار الإصابة بالمايکوبلازما الانتانية الدجاجية في هذه الدراسة أقل مما توصل إليه (Kahya et al., 2010) في نتائج دراستهم التي أجروها في ترکيا للکشف عن الإصابة بالمايکوبلازما الانتانية الدجاجية عند قطعان دجاج التربية باستخدام اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل ذي الوقت الحقيقي Real-time PCR فقد بلغ لديهم 68% (51 عينة ايجابية للاختبار من أصل 75 عينة) وقد يکون السبب في ذلک أنهم استخدموا اختبار Real-time PCR وهو أکثر حساسية من اختبار الـPCR المستخدم في هذه الدراسة. أظهرت نتيجة هذه الدراسة بأن اختبار الـPCR سريع ومفيد للتشخيص المباشر للعينات الحقلية للقطعان المشتبة بأن لديها إصابة بالمايکوبلازما الانتانية الدجاجية والزلالية وننصح باستخدام هذه التقنية في الکشف المبکر عن إصابات المايکوبلازما عند قطعان دجاج التربية.

REFERENCES

Bradbury, J.M. (2001): Avian Mycoplasmosis. In: Poultry Diseases.5th ed. Jordan.D. and Raragher T. EDS. W.b. Sanders London, UK, 178-193.

Buim, M.R.; Mettifogo, E.; Timenetsky, J.; Kleven, S.; Antonio, J. and Ferreira, P. (2009): Epidemiological survey on Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae by multiplex PCR in commercial poultry. Pesq. Vet. Bras. 29(7): 552-556.

Christensen, NH.; Yavari, CA.; Mc Bain, AJ. and Bradbury, JM. (1994): Investigation into the survival of Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae and Mycoplasma iowae on materials founds in poultry house environment. Avian pathol., 23: 127-143.

Fan, H.H.; Kleven, S.H.; Jackwood, M.W.; Johansson, K.E.; Pettersson, B. and Levisohn, S. (1995): Specks identification of avian mycoplasmas by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism assay. Avian Dis., 39: 307–398.

Garcia, M.; Ikuta, N.; Levisohn, S. and Kleven, S.H. (2005): Evaluation and comparison of various PCR methods for detection of Mycoplasma gallisepticum infection in chickens. Avian. Dis., 49: 125-32.

Gharaibeh, S. and Roussan, D.Al (2008): The Use of Molecular Techniques in Isolation and Characterization of Mycoplasma gallisepticum from Commercial Chickens in Jordan. Int. J. Poult. Sci., 7: 28–35.

Kahya, S.A.; Temelli, S.b.; Eyigor, A.b. and  Carli, T.K.a. (2010): Real-time PCR culture and serology for the diagnosis of Mycoplasma gallisepticum in chicken breeder flocks. VET MIC. 4758 1–6.

Kempf, I. (1998): DNA amplification methods for diagnosis and epidemiological investigations of avian mycoplasmosis. Avian Pathol., 27: 7–14.

Kempf, I.; Gesbert, F. and Guittet, M. (1997): Experimental infection of chickens with an atypical Mycoplasma gallisepticum strain: comparison of diagnostic methods. Res. Vet. Sci. 63, 211–213.

Kleven, S.H. (1997): Changing expectations in the control of Mycoplasma gallisepticum. Acta Vet. Hung. 45, 299–305.

Kleven, S.H. (2003): Mycoplasma synoviae infection. In Y.M. Saif (Ed.), Diseases of Poultry, 11^th  edn (pp. 756 _/766). Ames: Iowa State University Press.

Kleven, S.H.;  Jordan, F.T.W. and Bradbury, J.M. (1996): Avian Mycoplasmosis (Mycoplasma gallisepticum). In: Reichard, R. (Ed.), Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines. Office International Des Epizootics, Paris, France, pp. 512–521.

Ley, D.H. (2003): Mycoplasma gallisepticum Infection. In: Saif, Y.M., H.J. Barnes, J.R. Glisson, A.M. Fadly, L.R. McDougald and D.E. Swayne (Eds.). Diseases of Poult., 11th Edn. Iowa State Press, Ames, Iowa., pp:722-744.

Liu, T.; Garcia, M.; Levisohn, S.; Yogev, D. and Kleven, S. (2001): Molecular variability of the adhesion-encoding Gene pvpA among Mycoplasma gallisepticum strains and its application in diagnosis. J. Clin. Microbiol., 39: 1882-1888.

Mekkes, D.R. and Feberwee, A. (2005): Real-time polymerase chain reaction for the qualitative and quantitative detection of Mycoplasma gallisepticum. Avian Pathol. 34, 348–354.

OIE (2008): Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals, six^th ed. International des Epizooties (World Organization for Animal Health), Paris, p.486 (ISBN92-9044-510-6).

Pourbakhsh, S.A.; Shokri1, G.R.; Banani1, M.; Elhamnia, F. and Ashtari1, A. (2010):  Detection of Mycoplasma synoviae infection in broiler breeder farms of Tehran province using PCR and culture methods. Archives of Razi Institute, Vol. 65, No. 2, 75-81.

Roussan, D.A.; Al-Rifai, R.H.; Khawaldeh, G.Y.; Totanji, W.S. and Shaheen, I(2011):Ornithobacteriumrhinotracheale and Mycoplasma synoviae in broiler chickens in Jordan. Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 30 (3); 931-937.

Salisch, H.; Hinz, K.H.; Graack, H.D. and Ryll, M. (1998): A comparison of a

commercial PCR-based test to culture methods for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in concurrently infected chickens. Avian Pathol. 27, 142–147.

Wang, H.; Fadl, A.A. and Khan, M.I (1997): Multiplex PCR for avian pathogenic mycoplasmas. Mol. Cell. Probes, 11: 211–216.

Yamamoto, R. (1991): Mycoplasma meleagridis infection. In B.W. Calnek, C.W. Beard, H.J. Barnes, W.M. Reid & H.W. Yoder Jr (Eds). Diseases of Poultry, 9^th edn. (pp. 212-223).

Yoder, H.W.Jr (1991): Mycoplasma gallisepticum infection. In B.W.

Calnek, C.W. Beard; H.J. Barnes, W.M. Reid and H.W. Yoder Jr (Eds): Diseases of Poultry, 9^th edn. (pp. 198-212) Ames: Iowa State University Press.