ANTIBIOTIC RESISTANCE OF ESCHERICHIA COLI ISOLATED FROM POULTRY IN SYRIA

Dept. of Microbiology,

Faculty of Vet. Med., Al-Baath Univ., Syria.

Antibiotic Resistance of Escherichia Coli Isolated From Poultry in Syria

 (With 5 Tables)

By

B.M. Makhol; N. Habreh* and K. Sakurai **

* Diagnosis and Laboratory Analysis (Bacterial), Al-BaathUniversity,

Dept. of Microbiology, Faculty of Vet Med, Syria.

**A volunteer expert from JICA (The Japan International Corporation Agency)

(Received at 10/11/2010)

مقاومة المضادات الحيوية للإشريکية القولونية المعزولة من الدواجن في سوريا

برکات ميشيل مخول ،  ناجح هبره ، کينيتشي ساکوراي

أجريت الدراسة لتحديد وتقييم حساسية عترات الإشريکية القولونية المعزولة من طيور الدجاج تجاه العقاقير الشائعة الاستخدام في حقل الدواجن للحد من ظهور العترات المقاومة للمضادات الحيوية المتعددة. حيث طبقت الاختبارات الجرثومية والکيمياحيوية والتأکيدية باستخدام تقنية الانتربلوري واختبار التراص السريع; شخصت الإشريکية القولونية في 470 طير من أصل 600 طير يعاني من أعراض تنفسية واضحة وبنسبة (78,33%)، حيث تم عزل 1060 عزولة من الإشريکية القولونية من الأحشاء الداخلية (قلب، رئتين، کبد، طحال، رغامي) فکانت أعلى نسبة للعزولات من الرغامى وبنسبة (86,15%)، کما حددت الأنماط المصلية (O6,O8,O15,O78 (O1, الممرضة فکانت نسبة تواجدها في العزولات (42,55%). کما أظهرت نتائج هذه الدراسة أن کل العزولات المختبرة کانت مقاومة للمضادات حيوية (للبنسلين والأمبيسلين والتتراسيکلين والإرثرومايسين) بنسبة(100%)، وکانت بنسبة(95,7%) و(91,4%) من العزولات مقاومة للکنامايسين والنيومايسين على التوالي. بينما کانت حساسة للکوليستين بنسبة (69,4%)، يليها الستربتومايسين ثم التريمثوبريم والکلورام فينيکول بنسبة مئوية تتراوح من (36,2%-27,6%). في هذه الدراسة أظهرت العترات 24 نمط من المقاومة للمضادات الحيوية المختلفة (11نوع من المضادات الحيوية).

Summary

The study was carried out to define and evaluate the sensitivity of E.coli strains isolated from poultry to common antibiotics used in the field in order to limit the appearance of multi-antibiotic-resistant strains. Then after applying the bacterial or germinal and conformational biochemical tests by using intropolory techniques and quick agglutination tests. Existence of E.coli was diagnosed in 470 out of 600 hens suffering clear respiratory symptoms (78.33%). A number of 1060 isolates of E.coli had been taken from internal viscera, namely hearts, lungs, livers, spleens, tracheas. The latter contributed the highest percentage (86.15%) of the total number of isolates. Moreover, five patterns of pathogenic serum of E.coli (O1,O6,O8,O15,O78) were identified in (42.55%) of the isolates. The research results demonstrated that (100%) of all tested isolates were resistant to certain antibiotics (Penicillin, Ampicyllin, Tetracycline and Erythromycin) where 95.7 % and 91.4 % of the isolates were resistant to Kanamycin and Neomycin, respectively. On the other hand, (69.4%) of the isolates were found to be sensitive to Colistin, while sensitivity to Streptomycin, Trimethoprim and Chloramphenycol was between (36.2% - 27.6%). Finally speaking, in this study, E.coli strains were found to exhibit 24 resistance patterns to 11 different types of antibiotics.

Key words: Poultry, E.coli, antibiogram.

INTRODUCTION

المقدمــة

في الآونة الأخيرة ازداد نشوء الجراثيم المقاومة للمضادات الحيوية مما أدى إلى ظهور مشکلة کبيرة في صناعة الدواجن في سوريا مما صعب عملية اختيار وانتقاء المضادات الحيوية الفعالة في معالجة الحالات المرضية المختلفة في الحقل, هذه المشکلة هي نتيجة الاستخدام الواسع والعشوائي للمضادات الحيوية في مزارع الدواجن المختلفة. داء القولونيات من أهم الأمراض الشائعة والمسيطرة التي تصيب الدواجن من الناحية الاقتصادية (Margie et al., 1999).

الإشريکية القولونية هي المسبب الرئيسي لهذا المرض والمسؤولة عن العديد من الحالات المرضية المختلفة التي يتضمنها هذا الداء مثل التسمم الدموي بالقولونيات, مرض ورم العصيات القولونية الحبيبي (مرض هيجرز)، التهاب التامور ، التهاب المبيض ، التهاب البريتوان ، التهاب السرة وهي أيضاً تسبب نسبة نفوق تصل إلى حوالي 5-50 % في قطعان الدواجن . (Roy et al., 2006)

وهي غالبا" ما تسبب أمراض خطيرة وأحيانا" مميتة مثل التهاب السحايا، عدوى القناة البولية والإسهال الوبائي عند الدجاج البالغ والصغير بالعمر ومتلازمة الرأس المتورم والتهاب النسيج الخلالي (Gross, 1994).

فالإشريکية القولونية هي إحدى المسببات المرضية الأکثر شيوعاً وانتشاراً بين الجراثيم سلبيـة الغرام  في إحداث الأمراض الشائعـة التي تصيب الدواجن (Diekema et al., 1999).

على الرغم من أن ظاهرة مقاومة المضادات الحيوية من قبل الجراثيم سلبية الغرام هو شيء مألوف ، إلا أن ظهور بعض عترات الإشريکية المقاومة اعتبر أمر غير مألوف (Muder et al., 1997; Vromen et al., 1999).

کما أکدت العديد من الدراسات أن المضادات الحيوية تستخدم بشکل کبير کمحفزات نمو أو للتحکم أو للوقاية من الإصابات المرضية المختلفة في مجال صناعة الدواجن في العديد من البلدان، کما وجدت الدراسات أيضاً أن المضادات الحيوية الأکثر مقاومة من قبل الجراثيم هي تلک المستخدمة بشکل عشوائي وغير مدروس والشائعة الاستعمال بين مربي الدواجن(Okeke et al., 1999 ; Moreno et al., 2000).  بالإضافة لذلک وجد بعض الباحثين أن الاستخدام المفرط والسيئ للمضادات الحيوية  سواء عند البشر ، أو في الاستعمالات البيطري والزراعي يعتبر على الأغلب العامل الأکثر أهميـة في تسهيـل ظهور وانتقـاء وانتشـار الأحيـاء الدقيقـة التي تملک صفــة المقاومــة للمضـادات الحيويـة في کـلا الأدويـة البيطريـة والبشريـة (Neu, 1992; Witte, 1998; Gunner et al., 2004).

کما أدى الاستهلاک الحقلي الضخم للمضادات الحيوية في المجال البيطري في السنوات الأخيرة إلى زيادة وتطور أعداد العترات البکتيرية المقاومة للمضادات الحيوية نتيجة حدوث انتقال واسع وغير محدود للبلازميدات المسؤولة عن ظهور صفة المقاومة للمضادات الحيوية في الجراثيم الممرضة للبشر والحيوانات (Davies, 1994)، کما  أکدت العديد من الدراسات التي أجريت في أنحاء عديدة من العالم وجود عترات الإشريکية القولونية المقاومة للمضادات الحيوية في جميع العزولات البشرية والحيوانية التي تم دراستها (Amara et al., 1995).

توجد تقارير عن مقاومة الإشريکية للمضادات الحيوية المترافقة مع فشل المعالجة (Talan et al., 2004; Blondeau, 2004).

کما وجـد من خـلال الأبحـاث التي أجـريت أن الإشريکيـة القولونية مقاومـة لفلورکينولـون ومقاومـة لبعض المضادات الحيوية مثل أمبيسلين ، تتراسيکليـن ، کلـورام فينيکـول ، تريمثوبريـم ، سلفاميثازون ، جينتامايسين(Garau et al., 1999; Komp et al., 2003) .

کمـا وجـد أيضـا أن هنـاک زيادة هامة في مقاومة الإشريکيـة القولونيـة للفلورکينولونـات في العـديد من البـلدان خـلال العقـود القليلـة الماضيـة (Garau et al., 1999; Van Blkum et al., 2001; Viroy et al., 2005) ، أدرجت فـي قائمـة مـن أدويـة التـي تبـدي تجاههـا الإشريکيـة القولونيـة مقاومـة متفاوتــة الشـــدة : البنسليـن، سيفالوسبريـن ، عقاقيـر السلفـا (Flutt et al., 2000 ; Sahm et al., 2001) وفلوروکينولون(Goettsch et al., 2000). حديثاً أصبح هناک قلق متزايد من على انتقال الجراثيم المقاومة خلال السلسلة الأغذية ولذلک اعترفت منظمة الصحة العالمية أن استخدام المضادات الحيوية في الحيوانات  يوثر على مقاومة المضاد الحيوي في الإنسان.(Anonymous, 2000)

الغرض من البحث:

عزل الإشريکية القولونية من الدجاج بمختلف الأعمار وتقدير درجة مقاومة أو حساسية العترات المعزولة لبعض الصادات الحيوية المستعملة في المجال الحقلي.

MATERIALS and METHODS

المواد المستخدمة في البحث وطرق العمل

المواد وتضمنت الأتي:

1- أدوات تشريح

2- حافظات تحوي مبردات لحفظ العينات

3- وسط قاعدة الاجار المدمى

3- وسط ماکونکي

4- وسط الأيوزين وازرق المثيلين (EMB)

5- کواشف ومواد لتحضير الاختبارات الکيمياحيوية

6- العينات

طريقة البحث :  

1-جمع العينات :

جمعت 1390 عينة (فقط التي تظهرعليها تغيرات مرضية وتشريحية) من 600 طير حيث شملت الدراسة 185 مزرعة دجاج أمهات ودجاج اللحم بمختلف الأعمار: إما طيور نافقة حديثاً (لم يمضي على نفوقها أکثر من 6 ساعات) أو طيور مريضة يظهر عليها علامات مرضية تنفسية واضحة و من الطيور المشتبه بإصابتها بالإشريکية القولونية، حيث أخذت العينات من الأعضاء المصابة والتي تظهر عليها تغيرات مرضية بعد التشريح مباشرة مع مراعاة التعقيم المناسب وذلک من: القلب الرئة ، الکبد ، الطحال، القصبة الهوائية ، وأرسلت بحافظات معقمة إلى مخبر البحوث العلمية.

2- الزرع والاختبارات البيوکيميائية لتحديد هوية الجرثومة: العينات المأخوذة من أنسجة الأعضاء تم زراعتها على أغار ماکونکي وأغار أيوزين أزرق المثيلين ِEMB وهما وسطان تميزيان لجراثيم الإشريکية القولونية حيث تظهر مستعمرات هذه الجراثيم على منبت ماکونکي بلون وردي نتيجة تخميرها لسکر اللاکتوز ومستعمرات خضراء ذات لمعة معدنية على منبت (EMB) کما اجري العديد من الاختبارات البيوکيميائية (الأندول ، أحمر المثيل ، فوکس بروسکاوير، سيمون سترات ، اختبار OF ، أوکسيداز، والکاتــلاز) لتحديـد هويــة الاشريکيـة القولونيــة حســب طريقـة الباحـث (Krieg et al., 1984)

الجدول 1: نتائج الاختبارات البيوکيميائية لتحديد هوية عزولات الإشريکية القولونية

*OF: اختبار يستخدم للکشف عن قدرة الجراثيم سلبية الغرام على تخمير أو أکسدة السکريات,(اختبار تخمر وأکسدة السکريات)

**MR: اختبار أحمر المثيل   *** VP: اختبار فوکس بروسکاوير

3-الاختبارات المصلية:استخدمت أمصال ضدية للأنماط المصلية الممرضة للإشريکية القولونية O1,O6,O8,O15,O78 من أجل التقصي عن وجود هذه الأنماط المصلية للإشريکية القولونية الممرضة الطيرية  ضمن هذه العزولات، حسب الطرق القياسية للباحثين ((Glantz et al., 1962 ; Orskov et al., 1977 والموصوفة من قبل شرکة Denka Seiken Co.Ltd, Tokyo, Japan

4- اختبارات الحساسية:أجريت هذه الاختبارات بطريقة الانتشار بهدف اختيار المضادات الحيوية الأکثر فعالية بهدف التوصل لأفضل نتائج حقلية في المعالجة على أغار مولر هينتون (من شرکة هايميديا) باستخدام 11 نوع من أقراص الصادات الحيوية (أمبيسلين، بنسيلين، إرثرومايسين، کوليستين،  تتراسيکلين، ستربتومايسين، جينتامايسين، کنامايسين، نيومايسين، کلورام فينيکول، تريمثوبريم) والمصنعة من شرکة أمريکية (Becton Dickinson Microbiology Company,USA) وکما هو مفصل قي طريقة ((Bauer et al., 1966.

RESULTS

النتائـج

أظهرت النتائج بنأً على الاختبارات الجرثومية و الکيمياحيوية المطبقة على العينات أنه تم عزل 1060 عزوله من الإشريکية القولونية من أصل 1390 عينة تظهر عليها تغيرات مرضية أي بنسبة عزل (76,26%) حيث خضعت لاختبارات بيوکيميائية وشکلية لتحديد هويتها ، فکانت أعلى نسبة لتواجد هذه الجراثيم في الرغامى (86,15%) وأقلها في الکبد (70,18%).

جدول رقم 2: يوضح توزع العزولات ومعدلات الإصابة حسب الأعضاء المدروسة

وبإجراء التنميط المصلي لعزولات الاشريکية القولونية للتقصي عن الأنماط المصلية الممرضة O للإشريکية القولونية على 470عزولة باستخدام أمصال ضدية للأنماط المصلية الممرضة من الإشريکية القولونية O1,O6,O8,O15,O78 [DENKA SEIKEN Co.Ltd,Tokyo,Japan] فکانت نسبة تواجد هذه الأنماط (42.55%) موزعة على الشکل التالي : النمط المصلي O78 وهو النمط السائد والمسيطر في هذه الدراسة وبنسبة تواجد (19.15%) يليه النمط المصلي O6 (10.51%), ثم النمط المصلي O1 (8.51%)، والنمطان المصليان O8  O15,بنسبة تواجد (2.13%), أما الأنماط المصلية الأخرى غيرالمنمطة (54,45%) کما هو موضح في الجدول (3).

الجدول 3: تنميط عزولات الإشريکية القولونية التي تم عزلها في هذه الدراسة

أظهرت عزولات الإشريکية القولونية (1000 عزولة تم اختبار درجة تحسسها للمضادات الحيوية) أعلى نسبة حساسية تجاه کل الکولستين بنسبة 69,4 %, والستربتومايسين بنسبة %36,2 ، وبنسبة 31,9% للتريمثوبريم ، وبنسبة 27,6 % للکلورام فينيکول وبنسبة 12,7 % للجنتامايسين أما النيوماسين والکنامايسين فکانت نسبة التحسس لکل منهما متساوية 2,1 %. بينما أبدت أغلب العزولات مقاومة متفاوتة الشدة تجاه کل من الکناميسين والنيومايسين والکلورام فينيکول والجنتاميسين والستربتومايسين والکوليستين بنسبة (95,7 % ,91,4 % ,65,9 %  ,59,5 %، 59,5 %، 51,6%، 19,3%)على التوالي، في حين کانت کل العزولات مقاومة لکل من الصادات الحيوية التالية البنسلين والأمبيسلين والتتراسکلين والأريثرومايسين بنسبة (100 %) کما هو موضح في الجدول (4)، في هذه الدراسة أظهرت العترات 24 نمط مختلف من المقاومة للمضادات الحيوية المختلفة موضحة في الجدول(5).

الجدول 4: نسبة تأثير المضادات الحيوية على عزولات الإشريکية القولونية

الجدول 5: مقاومة الصادات الحيوية المتعددة لعزولات الإشريکية القولوني المدروسة

:PCبنسلين,AM:أمبيسيلين,:GNجنتامايسين,:KNکنامايسين,:SMستربتومايسين,:EMارثرومايسين, :CLکوليستين,:TCتتراسيکلين,:Cکلورام فينيکول,:NMنيومايسين,:STXسلفاديازين وتريمثوبريم,  R:مقاوم

DISCUSSION

المناقشـة

عزلت بهذه الدراسة الإشريکية القولونية من 470 طير بنسبة(78.33%)  من أصل 600 طير يعاني من أعراض تنفسية واضحة وهذه النتيجة متوافقة ومتشابهة مع ما سجله الباحث (Sharada et al., 2010) حيث کانت نسبة عزل للإشريکية القولونية (76,47%).

کما تم في هذه الدراسة التقصي عن الأنماط المصلية الممرضة O للإشريکية القولونية في 470 عزلة من عزولات الإشريکية القولونية المعزولة فوجد أن نسبة إجمالي تواجد هذه الأنماط (42.55%) موزعة على الشکل التالي : النمط المصلي O78 هو النمط السائد والمسيطر في هذه الدراسة بنسبة تواجد (19.15%) يليه النمط المصلي O6 (10.51%)، ثم النمط المصلي O1 (8.51%) ، والنمطان المصليان O8  O15, بنسبة تواجد (2.13%) لکل منهما، وهذه النتيجة جاءت متوافقة ومتشابهة مع الدراسات التي أجراها الباحث وزملاءه ، (Susantha et al., 2001) والذي استطاع تحديد الأنماط المصلية O8,  O1,O2, O78من حالات مصابة بداء القولونيات الطيري في کندا. 

کما وجد باحثون آخرون أن العديد من عزولات الإشريکية القولونية المرافقة بشکل شائع لداء القولونيات الطيري تنتمي في أغلب الأحيان للأنماط المصلية الممرضة O1,O2, O78 (Sojka and Carnagham,1961; Dho-Moulin et al., 1999)، وهذا أيضاً متوافقة مع ما تم إيجاده في هذه الدراسة.

مقاومـة المضـادات الحيويـة ازدادت حتى أصبحت مشکلة عالمية (Gunner et al., 2004) وذلک نتيجة النسبة الکبيرة من المضادات الحيوية المستخدمة بشکل عشوائي والتي تصل 50% من إجمالي الاستهلاک العالمي والتي تعطى مع  غذاء الحيوانات من أجل المعالجة الوقائية وأهداف زيادة النمو ، لکن 80% من إجمالي ما يعطى يکون غير ضروري (Harrison and Lederberg, 1998) وهذا متوافق مع ما تم إيجاده في هذه الدراسة ، فقد أظهرت عزولات الإشريکية القولونية في هذه الدراسة التي تم إجراؤها أن أعلى نسبة حساسية تجاه کل من الکولستين بنسبة 69,4 %, والستربتومايسين بنسبة %36,2 ، وبنسبة 31,9% للتريمثوبريم ,وبنسبة 27,6 % للکلورام فينيکول وبنسبة 12,7 % للجنتامايسين أما النيوماسين والکنامايسين فکانت نسبة التحسس لکل منهما متساوية 2,1 %.

بينما أبدت أغلب العزولات مقاومة متفاوتة الشدة تجاه کل الکناميسين والنيومايسين والکلورام فينيکول والجنتاميسين والستربتومايسين والکوليستين بنسبة تتراوح من (94,7 %) إلى (19,3%) على التوالي، في حين أنها کانت کل العزولات مقاومة لکل من الصادات الحيوية التالية البنسلين والأمبيسلين والتتراسکلين والأريثرومايسين بنسبة (100 %)، فقد وجد الباحث محمد وزملائه عام 2009 أن 52-88 % من عزولات الإشريکية القولونية کانت مقاومة للأمبيسلين ، والتتراسيکلين ,والإرثرومايسين کما وجد أيضاً أن کل العترات المختبرة کانت ذات مقاومة متعددة للأدوية (5-10 أنواع من الأدوية) (Muhammad et al., 2009) هذه النتائج کانت مشابهة لنتائج بحثنا.

لکن الدراسات الأخرى التي أجريت عام 2010 وجدت أن عزولات الإشريکية القولونية المعزولة من الدواجن کانت مقاومة للتتراسيکلين والإرثرومايسن وحساسة للأمبيسلسن والکنامايسين والنيومايسين (Sharada et al., 2010) وهذا يتخالف مع ما تم التوصل إليه في هذه الدراسة الحالية التي أجريت.

 کما أظهرت هذه الدراسة أن 1000 عزولة أظهرت 24 نمط مختلف من المقاومة للمضادات الحيوية المختلفة أما الدراسات التي أجريت عام 2008 على 39 عتره من الإشريکية القولونية أظهرت 19 نمط مختلف من المقاومة للمضادات الحيوية المختلفة .(Akinlabi et al., 2008)

من خلال نتائج هذا العمل وجد أن هناک حاجة لإعادة النظر عي استخدام المضادات الحيوية في قطاع تربية الدواجن في سوريا وأهمية أخذ خطوات حاسمة لتقليل الاستعمال العشوائي للمضادات الحيوية کمحاولة لمنع النتائج العکسية المحتملة في قطاع الإنتاج الحيواني وکذلک عند البشر من هنا وجدت  حاجة ملحة لوضع سياسة وخطط مدروسة للاستخدام الأمثل للمضادات الحيوية.

References

Amara, A.; Ziani, Z. and Bouzoubaa, K. (1995): Antibiotic resistance of Escherichia colistrains isolated in Morocco from chickens with colibacillosis.Vet.  Microbiol., 43: 325-330.

Anonymous (2000): WHO global principles for containments of antimicrobial resistance in animals intended for food. Geneva: WHO/CDS/CSR/APH/2001.4.

Bauer, A.W.; Kirby, W.M.M.; Sheris, J.C. and Truck, M. (1966): Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disc method. American J. Clinical Pathol., 145: 225-230.

Blondeau, J.M. (2004): Current issues in the management of urinary tract infections: extending release ciprofloxacin as a novel treatment options. Drugs 64: 611-628.

Davies, J. (1994): Inactivation of antibiotics and the dissemination of resistance genes. Science, 264: 375-382.

Dho, M. and Lafont, J.P. (1984): Adhesive properties and iron uptake ability in Escherichia coli lethal and non-lethal for chicks. Avian Diseases. 26: 787-797.

Diekema, D.J.; Pfaller, M.A.; Jones, R.M.; Doern, G.V.; Winokur, P.L. and Gales, A.C. (1999): Survey of blood stream infection due to gram negative bacilli frequency of occurrence and antimicrobial susceptibility of isolates collected in the United States, Canada and Latin America for the Sentry Antimicrobial Surveillance Program, 1997. Clin. Infect. Dis. 29: 595-607.

Flutt, A.C.; Jone, M.E.; Schmitz, F.J.; Acar, J.; Guptes, R. and Verhoef, J. (2000): Antimicrobial susceptibility and frequency of occurrence of clinical blood isolate in Europe from Sentry Antimicrobial Surveillance Program 1997 and 1998. Clin. Infect. Dis. 30:     454-460.

Garau, T.; Xercavins, M.; Rodriguez-Carhalleira, M.; Gomez-Vera, J.R.; Coll, I. and Vidal, D. (1999): Emergence and dissemination of quinolone resistant Escherichia coli in the community. Antimicrob. Agents Chemother. 43: 2736-2741.

Goettsch, W.; Van Pelt, W.; Nagelkerke, N.; Hendrix, M.G.; Buiting, A.G. and Petit, P.L. (2000): Increasing resistance to fluoroquinolones in Escherichia coli from urinary tract infections in the Netherlands. JAntimicrob. Chemother. 46: 223-228.

Gross, W.B. (1994): Diseases due to Escherichia coli in poultry. In C. L. Gyles (ed.). Escherichia coli in Domestic Animals and Humans. CAB International . Wallingford, UK, 237-260.

Gunner, S.S.; John, W.L.; Benedetta, A.; Elizabeth, A.L. and Stefano, L. (2004): The antimicrobial resistance containment and surveillance approach - a public health tool. WHO Bulletin 82: 12.

Harrison, P.I. and Lederberg, I. (1998): Antimicrobial resistance: issues and options. Washington D.C, NationalAcademy Press.

Kreig, N.R.; Holt, J.G. and Williams and Wilkins, (1984): Bergeys Manual of Systematic Bacteriol.,1:428, East Preston street, Baltimore, M.D.2 1202, USA.

Margie, D.L. and Lawrence, H.A. (1999): A Laboratory manual for the isolation and identification of avian pathogenic. 4^thed. American Association of Avian Pathogenic, Athens, G A.

Moreno, M.A.; Dominguez, L.; Teshoger, T.; Herrero, I.A. and Porrero, M.E. (2000): Antibiotic resistances monitoring: The Spanish  Program me. Int. J.Antimicrob. Agents., 14: 285-290. DOI: 10. 1016/S0924-8579(00)00138-2

Muder, R.R.; Brennen, C.; Drenning, S.D.; Stout, J.E. and Wagener, M.M. (1997): Multiple antibiotic resistant gram negative bacilli in a long term care facility: a case control study of patient risk factor and prior antibiotic use. Infect. Control Hosp. Epidemiol. 18:   809-813.

Muhammad Ali Akond; Hassan, S.M.R.; Saidul Alam and Momena Shirin, (2009): Antibiotic Resistance of Escherichia coli Isolated from Poultry and Poultry Environment of Bangladesh . Amerixan Journal of Environmental Sciences. 5(1): 47-52

Neu, H.C. (1992): The crisis in antibiotic resistance. Science 257:       1064-1073.

Okeke, I.N.; Lamikanra, A. and Edelman, R. (1999): Socio-economic and behavioral factors leading to acquired bacterial resistance to antibiotics in developing countries. Emerg. Infect. Dis., 5: 13-27.

Roy, P.; Edwin, P.G. and Purushothaman, V. (2006): Isolation of Escherichia coli isolates from hatchery and breeder hen. Indian Veterinary J., 87: 75-82.

Sharada, S.; Wilfred Ruban and Thiyageeswaran, M. (2010): Isolation, characterization and antibiotic pattern of Escherichia coli isolated from poultry. Amer-Euro J. Sci Res5(1):18-22.

Sahm, D.F.; Thornsberry, C.; Mayfield, D.C.; Jones, M.E. and Karlowsky, J.A. (2001): Multidrug resistant urinary tract isolates of Escherichia coli prevalence and patient dermographic in United States in 2000. Antimicrob. Agents Chemother. 45: 1402-1406. 

Sojka, W.J. and Carnagham, R.B.A. (1961): E. coli in poultry. Research in Veterinary Science. 2: 340-351.  

Susantha M. Gomis; Craig Riddell; Andrew, A.; Potter, Brenda and Allan, J. (2001): Phenotype and genotypic characterization of virulence facters of Escherichia coli isolated from broiler with simultaneous occurrence of cellulitis and other colibacillosis lesions. Can J. Vet. Res, 65: 1-6.  

Talan, D.A.; Naber, K.G.; and Palou, Elkharrat, J.D. (2004): Extended release ciprofloxacin (cipro XR) for treatment of urinary tract infections. Int. J. Antimicrob. Agents 23: 554-566.

Van Belkum, A.; Goessens, W.; Van Der Schee, C.; Lemmens-Dens Toom, N.; Vos, M.C. and Cornelissen, J. (2001): Emergence of ciprofloxacin resistant enterobacteriaea containing multiple gentamycin resistant associated integrons in a Dutch hospital. Emerg. Infect. Dis. 7: 862-871.

Viroy, M.; Lunkin, D.; Maslow, J.N.; Stieritz, D.D.; Carson, L.S. and Bilker, W.B. (2005): Longitudinal trends in antimicrobial susceptibilities across long term care facilities emergence of fluoroquinolone resistance. Infect. Control. Hosp. Epidemiol. 26: 56-62.

Vromen, M.; Vander Ven, A.M.; Knols, A. and Stobberingh, E.E. (1999): Antimicrobial resistance pattern in urinary isolates from nursing home residents: fifteen years of data review. J. Antimicrob. Chemother. 44: 113-116.

Witte, W. (1998): Medical consequences of antibiotics use in Agriculture. Science 279: 996-997.