PHYSIOLOGICAL EFFECTS OF THE EXTRACT OF ECBALLIUM ELATERIUM PLANT ON BLOOD COMPONENTS IN RABBITS

Dept. of Physiology, Faculty of Veterinary Medicine,

AlBaath Univ., Syria.

Physiological Effects of the extract of Ecballium elaterium plant on blood components in rabbits

(With 5 Tables and One Figure)

By

M. Wannos; N. Dabbagh and E. Rejjo*

* Dept. of Basic Sciences, Faculty of Dntic Medicine, Albaath Univ.

(Received at 3/4/2010)

التأثيرات الفسيولوجية لخلاصة نبات قثاء الحمار على الصورة الدموية

عند الأرانب

ماري ونوس ، نادر دباغ، ابراهيم رجو

هدفت هذه الدراسة إلى معرفة الجرعة القاتلة لنصف حيوانات التجارب (الأرانب) (L.D.50) من الخلاصة الکحولية ذات الترکيز10% لثمار نبات قثاء الحمار، ثم دراسة تأثير إعطاء خمس(L.D.50) على الصورة الدموية عند الأرانب. أجريت الدراسة على أرانب بيضاء من کلا الجنسين وذات أوزان متقاربة، حددت (L.D.50) خلال 24 ساعة باستخدام طريقة بهرنز وکاربر، فوجد أنها تساوي 780 ملغ/کغ، ثم تم دراسة التأثير المزمن للخلاصة بإعطاء الأرانب خمس (L.D.50) وذلک عن طريق الفم وبشکل يومي لمدة 5 أسابيع وفي نهاية التجربة وجد أنه أدى إلى زيادة معنوية لکل من الکريات الحمراء (RBC), وحجم الکريات الحمراء الوسطي (MCV), ومتوسط حجم الصفيحات (MPV), وزيادة غير معنوية لکل من الکريات البيضاء (WBC), والهيموغلوبين (HGB), والهيماتوتکريت (HCT), والنسبة المئوية لکل من اللمفاويات (%LYM) والقاعديات (GRA%), بينما کانت الزيادة في وحيدات النواة (MON) معنوية واضحة جداً, ومن جهة أخرى فقد تناقصت قيم کل من وزن الخضاب الوسطي (MCH), والترکيز الوسطي للخضاب (MCHC) بمعنوية واضحة.

Summary

The object of this study was to detect the fatal dose of half  animals of this experiment (rabbits) LD50 from the 10% concentration of alcohol abstract of the fruits of Ecballium elaterium and studying of the effect of introducing fifth of LD50 on direct bilirubin and total bilirubin and the weight changes in rabbits. The study was performed at white rabbits of both gender with proximate weights, LD50 was determined in 24 hours by Behrens and karbars method so we have found that it was 780mg\kg, Then we have studied the chronic effections of the abstract by giving rabbits fifth of LD50 daily and orally for five weeks, at the end of the experiment we found that it caused a significant increase in (RBC), (MCV), (MPV), and un significant increase in (WBC), (HGB), (HCT), ( %LYM), (GRA%), While clear significant increase in (MON). On the other side, (MCH) and (MCHC) had clear significant decreased.

Key words: نبات قثاء الحمار ، صورة الدم ، الأرانب

Introduction

المقدمـة

يعد قثاء الحمار نباتاً معمراً يعيش في منطقة البحر الأبيض المتوسط، وقد زرع في وسط أوروبا وانکلترا ، وهو ينتمي إلى العائلة القرعية (Cucurbitaceae) ، له جذر ثخين أبيض اللون تغطيه شعيرات کثيفة، ساقه متفرعة يصل طولها للمتر، أوراقه مثلثية الشکل تقريبا مغطاة بشعيرات کثيفة ووجها العلوي خشن وطولها 6-10 سم. الأزهار صفراء اللون، والثمرة بيضية خضراء اللون بطول 4 سم مملوءة بالعصير وعند لمس الثمرة الناضجة تندفع البذور والعصير منها إلى مسافة بعيدة (Kavalic et al., 2007). استخدم هذا النبات کنبات طبي لأکثر من 2000 سنة، ومع ذلک له تأثير عنيف جدا على الجسم ويعد استخدامه قليلاً في الأعشاب الحديثة [6،27]. يملک عصير القثاء صفة حامضية خفيفة إذ تبلغ قيمة الباهاء (pH) (5.62±0.21) ويمثل الراسب المجفف للعصير(Elaterium) نسبة 2.1± 0.1 % من وزن العصير الطازج. يتکون العصير من سکريات مرجعة ومعادن بشکـل رئيسـي، بروتينـات ، دهـون وهو خالـي تمامـا من الأليـاف (Gerges et al., 2007).

جدول رقم (1) يبين مکونات العصير وتراکيزها مع الخطأ المعياري (Gerges et al., 2007)

أجريت مقارنة بين خلاصة عصارة القثاء الناتجة من استخدام الميتانول(Methanol) کمادة حالة والخلاصة الناتجة من استخدام الإيتانول (ethanol)، فوجد أنهما متشابهتان من حيث وجود الکوکوربيتاسينات  ( B, D, I)، أما الکوکوربيتاسين (E) فقد وجد في خلاصة الميتانـول، بينمـا لم يعثـر عليـه في خلاصـة الإيتانـول. أخفقـت أسيتـات الإيتيـل       (Ethyl acetate) في ترسيب الکوکوربيتاسينات (B, E, I) ورسبت (D) بشکل قليل. وعند استخدام الکلوروفورم کمادة حالة وجد أنه لم يرسب الکوکوربيتاسين (E) وذلک بالمقارنة مع الميتانول. ويعد الميتانول أفضل مادة مذيبـة قـادرة على استخـلاص الکوکوربيتاسينـات (B, E, D, I) من العصـارة. تمثـل خلاصـة الميتانـوليک المجففـة لعصير القثاء (extract dried methanolic)  0.05 ±1.27% مـن وزن العصيـر الطـازج    (Gerges et al., 2007). يحوي عصير ثمرة قثاء الحمارعلى 20 بروتينا يتراوح وزنها الجزيئي بين (13-103) کيلو دالتون (Khalil and Qaoud, 1993). توجد ستة أنواع من الکوکوربيتاسينـات في عصارة الثمرة وهي: Cuc B, D, E, I, L, R, بالإضافـة إلى وجـود مشتقـات الکوکوربيتاسيـن الغليکوزيديـة فـي العصـارة أيضـا            (Seifert and Elgamal, 1997 (Attard and Sciluna-Spiteri, 2001;. يحتوي العصير بروتين، دهون وسکريات (Khalil and Qaoud, 1993). کذلک ثبت وجود التربينات الغليکوزيدية الثلاثية (triterpenoids glycosides) في عصير ثمار نبات قثـاء الحمـار (Chakravarty et al., 1997). تملک التربينات الثلاثية خواص مضـادة للالتهـاب (Duncan and Duncan, 1997)، بالإضافة إلى دورها في حماية الکبد (Miro, 1995). تعد الکوکوربيتاسينات ((Cucurbitacins مرکبات tetracyclic triterpenes المؤکسجة تختلف عن بعضها بوجود الهيدروکسيد على ذرات الکربون C-2, -3, -19, -24 کذلک بوجود وظيفة الکيتون على ذرة الکربون C-3 وبوجود رابطة مضاعفة بين ذرتي الکربون C-1 and C-2 ، ورابطة مضاعفة بين ذرتي الکربون C-23 and C-24, ، وتأستل مجموعة الهيدروکسي لذرة الکربون  C-26 کما في المخطط التالي (Chen et al., 2005):

مخطط  يبين بناء الکوکوربيتاسينات في العصارة B,D,E,I

ينسب عدد کبير من النشاطات الحيوية إلى الکوکوربيتاسينات ومشتقاتها الغليکوزيدية(Chen et al., 2005; Huang et al., 1998; Panosian et al., 1989) ، حيـث أظهـر کـل مـن الکـوکـوربيتـاسينCuc E                             (Duncan and Duncan, 1997; Duncan et al., 1996; Musza et al., 1994)    Cuc I، Cuc B (Arisawa et al., 1984) و(Rodriguez et al., 2003) Cuc D  نشاطا مضادا لتکاثر أنواع مختلفة من الخلايا السرطانية، بينما يملک کل من الکوکوربيتاسين Cuc R Cuc B , (Recio et al., 2004)  (Peters et al., 1999; Uphof, 1959) نشاطا مضادا للالتهاب.

وبهذا نجد أن تأثير الکوکوربيتاسيـن يرتبـط ارتباطـا کليا بترکيبـه الکيميائي (Sun et al., 2005) . تملک الکوکوربيتاسينات تاثيرا ساما للخلايا (Seeram et al., 2007)، حيث تزداد سميتها للخلايا طرداً مع کراهيتها للماء (Bartalis and Halaweish, 2005). يملک الراسب المجفف لعصير الثمرة (Elaterium) وعنصرهCuc B  تأثيرات وقائية وشافية من رباعي کلور الکربون 4CClالمحرض لسمية الکبد وتنکسه (Agil et al., 1999).

تمت دراسة تأثير إعطاء العصارة  الطازجة لثمار نبات قثاء الحمار بالفم عند الفئران فوجد أن الجرعة القاتلة لنصف حيوانات التجارب (L.D.50) تساوي  µl61من العصارة الطازجة لکل 27 g من وزن الفئران، وأن إعطاء الفئران تراکيز أعلى من(L.D.50) تؤدي إلى زيادة کثافة الدم بالمقارنة مع  المجموعات الشاهدة، کذلک قدرت کمية التربينات الثلاثية الموجـودة في عصيـر الثمـرة الطـازج فوجـد أنهـا تساوي 0.69 mg/ mlمن العصارة (Shabbar and Maslat, 2007).

استنتجت الجرعة المميتة للنصف (L.D.50) عند ذکور الجرذان البرصاء ، فوجد أنها تساوي 2.5 g ∕ kg  من وزن الجسم وذلک أثناء الحقن الوريدي للعصير الخام. وأدى إعطاء العصير الخام إلى تلزن الکريات الحمراء ، وقد کان هذا التأثير خاصا بالأنواع ، حيث أبدت الأرانب تأثـرا کبيـرا بينمـا کانـت الخـراف الأقـل حساسيـة بيـن الحيوانـات (Khalil and Qaoud, 1993).

أهداف البحث:

1 - معرفة الجرعة السمية لخلاصة النبات (L.D.50) عند الأرانب.

2 - دراسة تغيرات الصورة الدموية عند الأرانب تحت تأثير إعطاء خمس (L.D.50)عن طريق الفم.

MATERIALS and METHODS

مواد وطرق البحث

أولا: تحضير الخلاصة الکحولية Methanolic extract:

جمعت الثمار الناضجة المصفرة من نبات قثاء الحمار خلال شهري آب وأيلول ، ثم قطعت ونقعت في الکحول الميتيلي لمدة أسبوع في درجة حرارة الغرفة مع التحريک اليومي ، ثم تم تثفيل المنقوع في المثفلة (3000 دورة /د) لمدة /5/ دقائق ـ ومن ثم رشحت مرتين- المرة الأولى باستخدام ورق الترشيح العادي وثانيا باستخدام مرشحات غشائية قطرها 0.22 ميکرون ، وبعد ذلک تم تبخير الکحول الميتيلي من هذه الخلاصة وذلک باستعمال جهاز المبخر الدوراني الموجود في مخبر الکيمياء الحديثة في کلية الطب البيطري بالدرجة50 ْم وبسرعة دوران 170 دورة/ الدقيقة وبضغط سلبي 85 ميللي بار وبدرجة حرارة لدارة التبريد 6.1 ْم. وفي النهاية تم الحصول على الخلاصة المرکزة ذات القوام الجيلاتيني، ثم تم تجفيف الخلاصة باستعمال محم مائي على الدرجة 55°م لغاية الحصول على الخلاصة المرکزة الجافة التي تحوي المواد الفعالة (Wunwisa and Areeya, 2005; Tshikalange et al., 2005). وتم تحضير محلول 10% من الخلاصة المرکزة بوساطة الماء المقطر المعقم بالأوتوغلاف 121°م لمدة 15 دقيقة.

ثانيا: تحديد الجرعة القاتلة لنصف حيوانات التجارب(L.D.50) (التسمم الحاد):

تم تحديد الجرعة السمية القاتلة للنصف خلال 24 ساعة باستخدام الخلاصة الکحولية للنبات المحضرة بترکيز 10%. وقد شکلت /6/ مجموعات من الأرانب البيضاء من کلا الجنسين وهي ذات أوزان متقاربة مابين (300-700غ). وکل مجموعة فيها /5/ أرانب. تخضع هذه الأرانب لنفس الظروف من حيث الغذاء (علف محبب + عليقة خضراء) والماء ، وتوضع جميعاً في غرفة خاصة في مرکز البحوث العلمية والدراسات العليا في کلية الطب البيطري بدرجة حرارة (20-25) درجة مئوية. أعطيت المجموعات الست السابقة الذکر جرعات مختلفة ومتزايدة من الخلاصة الکحولية 10% عن طريق الفم لمعرفة نسب النفوق في کل مرة والأعراض التسممية التي يمکن مشاهدتها قبل النفوق. تم إجراء الصفة التشريحية وتحديد الجرعة السمية القاتلة للنصف (L.D.50) وفقا لطريقة بهرنز وکاربر(1953) وذلک بتطبيق القانون :

=DM-(∑Z.d ∕ n) L.D.50

حيث: : DM الجرعة العليا التي تقتل کل الأرانب في المجموعة خلال /24/ ساعة.

Z : متوسط النفوق في کل مجموعتين متتاليتين .

d : الفرق بين جرعات مجموعتين متتاليتين .

:  nعدد الأرانب في کل مجموعة .

تم اعتماد الترکيز 10% للخلاصة الکحولية.

ثالثا: التأثير المديد لخلاصة النبات (التسمم المزمن) :

تم استخدام 20 أرنب من کلا الجنسين بأوزان تتراوح من (300 -600غ) قسمت إل مجموعتين في کل مجموعة عشرة أرانب، مجموعة للخلاصة الميتانولية للنبات والمجموعة الثانية هي مجموعة الشاهد ، وضعت الأرانب في غرفة البحث العلمي بدرجة حرارة بين  (20-25) درجة مئوية، زودت بالعلف المحبب والعليقة الخضراء والماء بشکل يومي. جرعت أرانب المجموعة الأولى خمس الجرعة القاتلة للنصف (L.D.50) عن طريق الفم يوميا ولمدة 5أسابيع لکل أرنب حسب وزنه، وبعد انقضاء المدة تم أخذ عينات الدم حيث أخذ الدم مباشرة من القلب بواسطة محاقن معقمة سعة /3مل/، ثم يوضع في أنابيب اختبار نظيفة ومعقمة حاوية على مانع تخثر (أملاح ثنائـي الصوديـوم للإيتلين دياميـن رباعـي الخـل (EDTA)) (Schalm, 1975)، ثم نقل الدم مباشرة لدراسته مخبريا في مخبر الفيزيولوجيا- کلية الطب البيطري باستخدام جهاز العداد الآلي. شملت هذه المرحلة دراسة تغيرات کل من:

1-         عدد الکريات البيضاء WBC .

2-         عدد الکريات الحمراءRBC .

3-         حجم الکريات الحمراء الوسطي MCV.

4-         متوسط حجم الصفيحات MPV.

5-         الهيموغلوبين HGB.

6-         الهيماتوتکريت HCT.

7-         وزن الخضاب الوسطي MCH.

8-         الترکيز الوسطي للخضاب MCHC.

9-         النسبة المئوية لللمفاويات %LYM.

10-     النسبة المئوية للقاعديات GRA%.

11-     النسبة المئوية لوحيدات النواة % .MON

التحليل الإحصائي Statistical analyses :

النتائج التي تم الحصول عليها تم تدوينها في جداول الکترونية (EXCELL)، ثم حللت باستخدام Statistix- version 1.0 ∕ Analytical software ومن خلاله تم حساب قيم کل مـن المتوسـط الحسابـي Average والانحراف المعياري (SD) والخطأ المعياري (SE) standarad error للقيم الدموية ومعرفة قيمة P التي تحدد الفروقات المعنوية بين المجموعتين الأولى والثانية خلال مرحلة التسمم المزمن.

Results

النتائـج

1-    الجرعة السمية القاتلة للنصف(LD50) (التسمم الحاد):

تم تجريع خمس مجموعات من الأرانب البيضاء عن طريق الفم من الخلاصة الميتانولية ترکيز 10% وتراوحت الجرعات مابين (200-1000 ملغ/کغ) ، وکل مجموعة تتألف من خمس أرانب ذات أعمار وأوزان متقاربة وتم حساب (L.D.50)خلال 24 ساعة حسب الجدول التالي:

جدول (2) يظهر نتائج تجربة تحديد الجرعة السمية الحادة (L.D.50) للخلاصة الکحولية لثمار نبات قثاء الحمار

وحسبت الجرعة القاتلة للنصف بعد تطبيق قانون بهرنز وکاربر:

 =DM-(∑Z.d ∕ n) (L.D.50)                              

الجرعة القاتلة للنصف   (L.D.50) =  1000  -   (1100 ÷ 5) =  780ملغ/کغ .

التأثير المديد لخلاصة النبات (التسمم المزمن):

 رقمت أرانب المجموعتين ووزنت، وجرعت أرانب مجموعة الخلاصة الميتانولية خمس الجرعة القاتلة للنصف (L.D.50)؛ 0أي: (780÷ 5 = 156ملغ/کغ) لکل أرنب حسب وزنه بينما أعطيت أرانب مجموعة الشاهد ماء مقطر لکل أرنب يوميا ولمدة خمس أسابيع، وفي نهاية التجربة أخذت عينات الدم من جميع الأرانب وحللت مخبريا، وکانت النتائج کمايلي :

1-     الکريات البيضاء (WBC): بلغ متوسط عدد الکريات البيضاء عند الأرانب الشاهد11׳10 /³ mmوقد ازداد عددها بشکل غير معنوي 0.05 p>عند أرانب المجموعة الکحولية إلى12.94  ×10³  /³mm  کما في الجدول رقم(3).

2-     الکريات الحمراء (RBC): بلغ متوسط عدد الکريات الحمـراء عنـد الأرانب الشاهـد5.32 ×⁶10/³ mmوقد ازداد عددها بشکل معنوي  0.01p< عند أرانب المجموعة الکحولية إلى 6.02 ×⁶10 /³mm کما في الجدول رقم(3).

3-     الهيموغلوبين (HGB): بلغ متوسطالهيموغلوبين عند الأرانب الشاهد 11.5    g ∕dl وقد ازداد بشکل غير معنوي  0.05 p>عند أرانب المجموعة الکحولية إلى12.11 g ∕dl کما في الجدول رقم(3).

4-     الهيماتوکريت(HCT): بلغ متوسط الهيماتوکريتعند الأرانب الشاهد 36.36 % وقد ازداد بشکل غير معنوي  0.05 p>عند أرانب المجموعة الکحولية إلى 37.18% کما في الجدول رقم(3).

5-     حجم الکريات الحمراء الوسطي (MCV): بلغ متوسط حجمهاعند الأرانب الشاهـد 60.57 ³µm وقد ازداد بمعنوية ضعيفة 0.05 P <عند أرانب المجموعة الکحولية إلى63.13³ µmکما في الجدول رقم(4).

6-     وزن الخضاب الوسطي(MCH): بلغالوزن الوسطي عند الأرانب الشاهد21.61   pgوقد انخفض بشکل معنوي0.01 p< عند  أرانب المجموعة الکحوليةإلى18.38pg کما في الجدول رقم(4).

7-     الترکيز الوسطي للخضاب (MCHC): بلغالترکيز الوسطي عنـد الأرانب الشاهد 31.29g∕dl وقد انخفض بشکل معنويواضح جدا 0.0001 P<عند أرانب المجموعة الکحوليةإلى 28.59  g∕dlکما في الجدول رقم(4).

8-     متوسط حجم الصفيحات (MPV): بلغ متوسط حجمهاعند الأرانب الشاهد 5.26  µm³وقدازداد بمعنوية ضعيفة 0.05 P< عند أرانب المجموعة الکحولية إلى 5.99µm³ کما في الجدول رقم(4).

9-     النسبة المئوية لللمفاويات (LYM): بلغت عند الأرانب الشاهد 32.48 % وقد ازدادت بشکل غير معنوي 0.05 p>عند أرانب المجموعة الکحولية إلى38.1 % کما في الجدول رقم(5).

10- النسبة المئوية لوحيدات النواة (MON): بلغت عند الأرانب الشاهد7.35 % وقد ازدادت بشکل معنويواضح جدا 0.0001 P<عند أرانب المجموعة الکحوليـةإلى10.49 % کما في الجدول رقم(5).

11- النسبة المئوية للقاعديات (GRA): بلغت عند الأرانب الشاهد 38.64 % وقد انخفضت بشکل غير معنوي 0.05 p>عند أرانب المجموعة الکحولية إلى37.49 % کما في الجدول رقم(5).

جدول (3) يبين الفرق بعدد الکريات الحمراء والبيضاء والهيموغلوبين والهيماتوکريت بين مجموعتي التجربة

-  غير معنوية      * معنوية بشکل ضعيف      ** معنوية     *** معنوية واضحة      **** معنوية واضحة جدا

جدول (4) يبين الفرق في حجم الکريات الحمراء الوسطي، وزن الخضاب الوسطي، الترکيز الوسطي للخضاب ومتوسط حجم الصفيحات بين مجموعتي التجربة

جدول (5) يبين الفرق في النسبة المئوية لکل من اللمفاويات ووحيدات النواة والقاعديات بين مجموعتي التجربة

DISCUSSION

المناقشـة

أکد Agil et al. (1999) أن زيادة قيمة MCVتحدث في عدة حالات ، حيث تزداد عند تراص الکريات الحمراء الذي يؤدي إلى قيم عالية کاذبة لمتوسط الحجم الکريوي لکن يستبعد هذا الاحتمال بسبب أننا حرصنا على أن يکون سحب عينات الدم بشکل سليم بعيد عن الأخطاء ، کذلک تزداد عند نقص بعض العناصر التي تعترض بناء الأحماض النووية وتثبط انقسام الخلايا وبالتالي وجود کريات حمراء کبيرة کما هو الحال عند نقص فيتامين 12B  وحمض الفوليک لکن هذه الحالة لا تحصل عند الحيوانات ، کذلک تزداد MCV عند کثرة الخلايا الشبکية وهي أشکال غير ناضجة للکريات الحمراء وهذا دليل على أن الخلاصة الکحولية لنبات قثاء الحمار قد أدت إلى زيادة إنتاج الخلايا الشبکية.

إن نقص متوسط ترکيز الخضاب الکريويMCHC  يدل على کثرة الخلايا الشبکية التي لا تحتوي على کافة مکونات الخضاب وهذا ماأکده Agil et al. (1999) والذي أکد أنه المنسب الأدق للکريات الحمراء لأنه لايحتاج إلى عد الحمر.

أکد Saba et al. (2009) الذي أجرى دراسة لتأثير خلاصة نبات من الفصيلة القرعية على الجرذان مماثل تماما بمفعوله لنبات قثاء الحمار أن إعطاء الخلاصة للجرذان قد أدى إلى زيادة القيم الطبيعية لکل من الهيماتوکريتPCV))، عدد الکريات الحمراءRBC))، عدد الکريات البيضاءWBC)) وخاصة اللمفاويات lymphocyte)) بينما تناقص عدد العدلات (neutrophils)، الهيموغلوبين HB)) و(MCV)، في حين أنها أنقصت قيم کل من MCH)) وMCHC))، وقد أکد أن زيادة قيم MCV، RBC وPCV المترافقة مع نقص قيم MCHوMCHC  يشير إلى زيادة إنتاج الخلايا الشبکية (reticulocytosis) وهذا يشير إلى أن الخلاصة الميتانولية للنبات تمثل عامل منشط لزيادة تکون الکريات الحمراء.

إن سبب الزيادة غير المعنوية لعدد الکريات البيض الإجمالي المترافق مع زيادة وحيدات النواة بشکل معنوي ، هو تعرض الحيوان لإجهاد مزمن بسبب الجرعات اليومية من خلاصة النبات.

يعزى سبب الزيادة الغير معنوية للمفاويات، لکون نبات قثاء الحمار يسبب تحفيز مناعي ويعمل کمضاد للالتهاب وهذا ماأکده Escandell et al. (2007) بأن التربينات الثلاثية الموجودة في نبات قثاء الحمار تعمل کعامل مضاد للالتهاب.

REFERENCES

المراجع العربيـة

إبراهيم ، سامر ؛ حبرة ، ناجح (2005-2006): التشخيص المخبري ، منشورات جامعـة البعث ، کلية الطب البيطري.

المراجع الانجليزية

Agil, A.; Miro, M.; Jimenez, J.; Aneiros, J.; Caracuel, M.D.; Garcia-Granados, A. and Navarro, M.C. (1999): Isolation of anti-hepatotoxic principle from the juice of Ecballium elaterium. Planta Medica 65 (7), 673–675.

Arisawa, M.; Pezzuto, J.M.; Kinghorn, A.D.; Cordell, G.A. and Farnsworth, N.R. (1984): Plant anticancer agents. XXX: cucurbitacins from Ipomopsis aggregata. Journal of Natural Products 47 (2), 393–394.

Attard, E.G. and Sciluna-Spiteri, A. (2001): Ecballium elaterium: the in vitro source of cucurbitacins. Fitoterapia 72, 46–53.

Bartalis, J. and Halaweish, F.T. (2005): Relationship between cucurbitacins reversed phase high-performance liquid chromatography hydrophobicity index and basal cytotoxicity on HepG2 cells. Journal of chromatography. B, Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences 818 (2),     159–166.

Behrens and Karber (1953): Arch-Fur-ex-path-undphar.

Bown, D. (1995): Encyclopaedia of Herbs and their Uses. Dorling Kindersley, London. ISBN 0-7513-020-31 .

Chakravarty, A.K.; Sarkar, T.; Das, B.; Masuda, K. and Shiojima, K.  (1997): Triterpenoids Glycosides from fruits of Ecballium elaterium. J. Indian Chem. Soc. 74: 858–863.

Chen, J.C.; Chiu, M.H.; Nie, R.L.; Cordell, G.A. and Qiu, S.X. (2005): Cucurbitacins and cucurbitane glycosides: structures and biological activities. Natural Product Reports 22, 386–399.

Duncan, K.L.K.; Duncan, M.D.; Alley, M.C. and Sausville, E.A. (1996): Cucurbitacin E-induced disruption of the actin and vimentin cytoskeleton in prostate carcinoma cells. Biochemical Pharmacology 52, 1553–1560.

Duncan, M.D. and Duncan, K.L. (1997): Cucurbitacin E targets proliferating endothelia. The Journal of Surgical Research 69 (1), 55–60.

Escandell, JM.; Recio, MC.; Ma´ n˜ ez, S.; Giner, RM.; Nicola´ s, MC. and Rı´os, JL. (2007): Cucurbitacin R reduces the inflammation and bone damage associated with adjuvant arthritis in Lewis rats by suppression of Tumor Necrosis Factor in T Lymphocytes and Macrophages. J. Pharmacol. Exp. Therap. 320: 581-590.

Gerges, H.G.; Abou Khalil, R.; Abou Mansour, E.; Magdalou, J.;  Chahine,  R. and Ouaini, N. (2007): Cucurbitacins from Ecballium elaterium juice increase the binding of bilirubin and ibuprofen to albumin in human plasma.ELSEIVER. Chemico-Biological Interactions. 169: 53– 62.

Huang, Y.; De Bruyne, T.; Apers, S.; Ma, Y.L.; Claeys, M.; Berghe, D.V.; Pieters, L. and Vlietink, A. (1998): Complement-inhibiting cucurbitacin glycosides from Picria fel-terrae. Journal of Natural Products 26, 61 (6): 757–761.

Kavalci, C.; Durukan, P.; Cevik, Y. and Ozer, M. (2007): Angioedema due to Ecballium elaterium: case report. Erciyes- niversitesi , Kayseri. 3: 39-40.

Khalil, A.M. and Qaoud, K.M. (1993):Toxicity and Partial Characterization of Ecballium elaterium Fruit Juice. Pharmaceutical Biology. 

http://www.informaworld.com/smpp/title~content=t713721640~db=all~tab=issueslist~branches=31 – V.3131, Issue 2, pages      135–141.

Miro, M. (1995): Cucurbitacins and their pharmacological effects. Phytother Res. 9: 159-168.

Musza, L.L.; Speight, P.; McElhiney, S.; Barrow, C.J.; Gillum, A.M.; Cooper, R. and Killar, L.M. (1994): Cucurbitacins, cell adhesion inhibitors from Conobea scoparioides. Journal of Natural Products 57 (11): 1498–1502.

Panosian, A.G.; Dadaian, M.A. and Gevorkian, G.A. (1989): Effect of stress and the adaptogen cucurbitacin R diglycoside on arachidonic acid metabolism. Problemy Éndokrinologii (Mosk) 35 (1), 58–61.

Peters, R.R.; Saleh, T.F.; Lora, M.; Patry, A.J.; De Brum Fermandes, A.J.; Farias, M.R. and Ribeiro-do-Valle, R.M. (1999): Anti-inflammatory effects of the products from Wilbrandia ebracteata on carrageenan-induced pleurisy in mice. Life Sciences 64,  2429–2437.

Recio, M.C.; Prieto, M.; Bonucelli, M.; Osri, C.; Giner, R.M.; Cerda-Nicolas, M. and Rios, J.L. (2004): Anti-inflammatory activity of two cucurbitacins isolated from Cayaponia tayuya roots. Planta Medica 79 (5), 414–420.

Rodriguez, N.; Vasquez, Y.; Hussein, A.A.; Coley, P.D.; Solis, P.N. and Gupta, M.P. (2003): Cytotoxic cucurbitacin constituents from Sloanea zuliaensis. Journal of Natural Products 66 (11),         1515–1516.

Saba, A.B.; Oridupa, O.A. and Ofuegbe, S.O. (2009): Evaluation of haematological and serum electrolyte changes in Wistar rats administered with ethanolic extract of whole fruit of Lagenaria breviflora Robert. Journal of Medicinal Plants Research 3(10): 758-762.

Schalm, O.W. (1975): Vet. Hematology. 3th ed. Bailliiere, London.

Seeram, N.P.; Jayaprakasam, B. and Nair, M.G. (2007): Anticancer and antiinflammatory activities of cucurbitacins from Cucurbita andreana. Cancer Lett. 189: 11–16.

Seifert, K. and Elgamal, M.H.A. (1997): New cucurbitacin glucosides from Ecballium elaterium. L. Pharmazie 32 (10): 605–607.

Shabbar,I. and  Maslat, A. (2007): How To Elicit The Genotoxic Effect Of Aqueous Extract of Ecballium elaterium Using Micronucleus Assay And DNA Single Strand Break Techniques. The Internet Journal of Health, Volume 6 Number 2,ISSN: 1528-8315.

Stuart, M. (1979): The Encyclopedia of Herbs and Herbalism Orbis Publishing. London. ISBN 0-85613-067-2 .

Sun, J.; Blaskovich, M.A.; Jove, R.; Livingston, S.K.; Coppola, D. and Sebti, S.M. (2005): Cucurbitacin Q: a selective STAT3 activation inhibitor with potent antitumor activity. Oncogene 24 (20),  3236–3245.

Tshikalange, T.E.; Meyer, J.J. and Hussein, A.A. (2005): Antimicrobial activity,toxicity and the isolation of a bioactive compound from plants used to treat sexuallay transmitted disease. J. Ethnopharmacol. 96 (3): 515-9.

Uphof,  J.C.Th. (1959): Dictionary of Economic Plants. Weinheim, Plants for a Future Registered Charity No. 1057719. Thu Dec 30 07: 19:47.

Wunwisa, K. and Areeya, K. (2005): Antimicrobial properties of the traditional flower vegetable extracts. Au J.T.(2) P: 71-74.