SEROLOGICAL STUDY ON CHICKENS GAINED FROM BREEDERS VACCINATED WITH TWO DIFFERENT DOSES OF CIAV VACCINE

SEROLOGICAL STUDY ON CHICKENS GAINED FROM BREEDERS VACCINATED WITH TWO DIFFERENT DOSES OF CIAV VACCINE

KIFAH NASHAR

Faculty of Vet. Med., El-Bath Unive., Syria.

دراسة مصلية لصيصان دجاج لحم ناتجة من أمات محصنة بجرعتين مختلفتين من لقاح مرض فقر الدم المعدي

کفـاح نشـار

الهدف من هذه الدراسة تقييم واقع حقلي يعتمد على تحصين جزء من أفراد قطيع الأمَّات والسماح له بالاختلاط مع باقي أفراد القطيع لينتقل إليها فيروس اللقاح بعد طرحه من جسم الطير،وبالتالي تتشکل عندها أضداد نوعية لفقر الدم المعدي.

تمت التجربة في ظروف حقلية، حيث حُصِّن قطيع الأمَّات الأول بجرعة کاملة من اللقاح الحي المُضعَّف، بينما تم تحصين 20% من قطيع الأمَّات الثاني، ثم تم الحصول على قطيعي صيصان دجاج لحم، حُصل على صيصان القطيع الأول من قطيع الأمَّات الأول بينما حصل على صيصان القطيع الثاني من قطيع الأمَّات الآخر، ثم جمعت عينات دم من قطعان التجربة وقورنت في نقاط عدة منها معامل الاختلاف CV% باختبار الاليزا،وقد أشارت النتيجة إلىأن التجانس أعلى في الأمَّات المحصنة بشکل کامل وکذلک في الصيصان الناتجة عنها.

کما تمت دراسة نسبة العينات التي أعطت مستوى أضداد صفراً في اختبار الاليزا في جميع قطعان التجربة، وقورنت نسبة العينات بين قطيعي الأمَّات التي أعطت باختبار الاليزا قيمة أعلى من 5000 لما لها من أهمية في حماية الذرية. کما تمت دراسة نقاط أخرى، وقد أظهرت جميع نتائج هذه الدراسة أهمية تحصين القطيع کاملاُ.

INTRODUCTION

المقدمـة

عرف مرض فقر الدم المعدي کمرض جديد يصيب صغار الدجاج، ويسببه فيرس جديد (Yuasa et al., 1979) صنف کعضو وحيد في جنس سيرکوفيرس cyrovirus  من عائلة سيرکوفيدا circoviridae (Koch et al., 1995).

وهو فيرس غير مغلف، يبلغ قطرة حوالي 20 نانومتر، يحوي على الحمض النووي الريبي المنقوص الأکسجين(DNA) حلقي مفرد السلسلة، يتراوح وزنه الجزيئي ما بين 1.8-3.8kb (Gelderblom et al., 1989). حيث عــزل الفيــروس للمــرة الأولى عام 1979 في اليابان (Yuasa et al., 1979)، وأشارت المعلومات المصلية إلى وجــود انتشار واســـع لفيــروس فقــر الدم المعــدي في معظم دول العالم (McNulty, 1991).

يصيب الفيروس الدجاج وهو الثوي الوحيد المعروف للفيروس، وتعتبر جميع الأعمار حساسة للخمج، إلا أن قابلية الإصابة في الصيصان الناتجة من أمَّات محصنة تتناقص بصورة طبيعية وذلک تدريجياً خلال 1-3 أسابيع الأولى من الفقس (Goryo et al., 1985). إن العَرَض الرئيسي للمرض هو حدوث فقر دم يبلغ ذروته بعد (14-16) يوماً بعد الخمج، وانخفاض في قيمة مکداس الدم (الهيماتوکريت) إلى قيمة تتراوح ما بين    (6-27%)، ويلاحظ على الطيور المصابة انخفاض في الزيادة الوزنية ونسبة نفوق لا تتجاوز 30%، أما نسيجياً فيلاحظ ضمور لمفاوي متعمم، حيث يسبب المرض کبتاً مناعياً وإصابة متکررة ومعقدة بمسببات ثانوية فيروسية أو بکتيرية أو فطرية (Yuasa, 1983).

ينتقل مرض فقر الدم المعدي عند الدجاج عمودياً وأفقياً (Yuasa et al., 1983b)، حيث يتم الانتقال العمودي للفيروس عن طريق بيض التفريخ والذي يعتبر الطريق الأکثر شيوعاً في انتقال المرض (Chettle et al., 1989).

إن التحصين ضد المرض باستراتيجياته الحالية يعتمد على تأمين مناعة عالية للصيصان الصغيرة ضد فيروس فقر الدم المعدي وذلک بتحصين قطعان الأمَّات والنجاح في الحدِّ من حدوث المرض في الصيصان النامية (Engström, 1999).

أما بالنسبة للمناعــة العمريـة فإنها تتطـــور خـلال الأسبــوع الأول من العمـــر، وتکتمــل عند عمــر ثلاثـــة أسابيــع (Yuasa & Imai, 1986).

تؤمن الأضداد الأميَّة مناعة قوية للصيصان ضد خمج فيروس فقر الدم المعدي وتستمر هذه الحماية لمدة ثلاثة أسابيع (Otaki et al., 1992)، وإن ارتفاع مستوى الأضداد عند الأمَّات يؤدي إلى رفع مستوى حماية الصيصان الناتجة من تلک الأمَّات (Pagè-Manté et al., 1997).

إن الأضداد الأميَّة ضد خمج فقر الدم المعدي تقي الصيصان بشکل فعال من الإصابة بالمرض شريطة عدم وجود کبت مناعي من مسببات فيروسية أخرى مثل الخمج بمرض التهاب الجراب المعدي (Yuasa et al., 1980a).

MATERIALS and METHODS

مواد وطرائق البحث

مواد البحث:

أ- الطيور:

1- طيور المجموعة الأولى: قطيع أمَّات حُصِّن بنسبة 100% بماء الشرب بعمر 15 أسبوعاً.

2- طيور المجموعة الثانية: قطيع أمَّات حُصِّن بنسبة 20% بماء الشرب بعمر 15 أسبوعاً.

3- طيور المجموعة الثالثة: قطيع دجاج لحم حُصِل على صيصانه من المجموعة الأولى.

4- طيور المجموعة الرابعة: قطيع دجاج لحم حُصِل على صيصانه من المجموعة الثانية.

ب- الأدوات المخبرية: محاقن سعة 4 مل- أنابيب زجاجية سعة 20 مل تستخدم لتثفيل عينات الدم- قطن وکحول- أنابيب ابندورف لحفظ عينات المصل في المجمِّدة- رؤوس ماصة دقيقة بلاستيکية- ماصَّات دقيقة مفردة ومتعددة الرؤوس- حافظة لنقل عينات الدم للمخبر- ماء مقطر- مؤقت زمني- مثفلة - جهاز قارئ اليزا- مجموعة تشخيصية للکشف عن الأضداد النوعية لفقر الدم المعدي من شرکة (SYNBIOTICS).

تم استخدام لقاح حي مضعف من شرکة لوهمان نموذج THYMOVAC حيث تحوي الجرعة الواحدة ((10 log4.5 TCID50 من فيروس فقر الدم عترة CUX-1.

 طرائق العمل:

التحصين: تم تحصين أفراد المجموعة الأولى بنسبة 100% عن طريق ماء الشرب، في حين أن طيور المجموعة الثانية تم تحصين 20% من أفرادها بماء الشرب، ثم سمح لهذه الطيور بالاختلاط مع باقي أفراد القطيع.

بينما لم يحصَّن أفراد القطيع الثالث والرابع.

جمع عينات الدم:

تم جمع الدم من طيور المجموعة الأولى والثانية عشوائياًعن طريق وريد الجناح باستخدام محقن سعة 4مل، ولقد تم جمع الدم في کلا القطيعين باتباع نفس الترتيب حيث تم جمع الدم قبل التحصين مباشرة في عمر خمسة عشر أسبوعاً ثم بعد التحصين بأسبوع، أسبوعين، ثلاثة أسابيع، ثم بعد أربعة أسابيع، وقد تم جمع عينات الدم من صيصان المجموعة الثالثة والرابعة عن طريق الوريد الوداجي، حيث تم جمع عينات الدم أربع مرات من کلا القطيعين حيث تم الجمع في عمر (1، 7، 14 و 21 ) يوماً.                                      

ونُقلت عينات الدم في الحافظة المبرَّدة إلى المختبر حيث ثفلت في أنابيب زجاجية سعة 20 مل بمعدل 2500 د/د لمدة عشرة دقائق، ووزع المصل في أنابيب ابندورف ورقمت ووضع عليها تاريخ الجمع والمصدر وحفظت في التجميد العميق على الدرجة -20 م، ليصار إجراء اختبار الاليزا عليها في وقت لاحق باستخدام مجموعة تشخيصية للکشف عن الأضداد النوعية لفقر الدم المعدي التجاري من شرکة (Synbiotic Corporation, USA).

وحسب تعليمات الشرکة المصنعة أنه عندما تکون قيمة S/P ≤ 0.349 تعتبر هذه العينة ذات معيار من الأضداد صفراً (zero titer)، وعندما تکون قيمة S/P ≥ 0.350تعتبر عينة ايجابية أي يکون معيار الأضداد أکبر أو يساوي 1472. کما أخذ بعين الاعتبار العينات ذات القيمة التي هي أعلى من 5000 حيث تمت مقارنة نسبة هذه العينات في کلا قطيعي الأمَّات، تمت مقارنة نسبة هذه العينات في کلا قطيعي الأمَّات، حيث تعتبر الأمَّات التي تتمتع بهذا المعيار في دمها قادرة على نقل کمية کافية من الأضداد النوعية تستطيع معها تأمين مستوى الحماية إلى ذريتها بما يؤمن حماية نسلها من الإصابة بمرض فقر الدم المعدي خلال الأربعة أسابيع الأولى من عمرها Canal et al., 2004; Roussan, 2006))

RESULTS

النتائــج

نتائج المجموعة الأولى:

حُصِّنت أفراد هذه المجموعة باللقاح الحي المضعَّف ضد مرض فقر الدم المعدي عند الدجاج وکانت النتائج کما هو موضح بالمنحني البياني رقم 1:

المنحني البياني رقم 1: تطور المتوسط الحسابي لمعيار الأضداد في المجموعة الأولى:

بلغ متوسط معامل الاختلاف (CV%) 24,5%، وکانت نسبة العينات التي أعطت قيمة صفراً في اختبار الاليزا  zero titer0%، وکانت النسبة المئوية للعينات التي أعطت معيار أضداد أکبر من (5000) في الجمع الأخير للدم في عمر تسعة عشر أسبوعاً94%.

نتائج المجموعة الثانية:

حُصِّنت هذه المجموعة بنسبة 20%،حيث تم جمع الدم قبل التحصين مباشرة ثم بعد التحصين وکانت النتائج کما هو موضح بالمنحني البياني رقم2:

المنحني البياني رقم 2: تطور المتوسط الحسابي لمعيار الأضداد في المجموعة الثانية:

وکان متوسط معامل الاختلاف CV%54,4%، و کانت نسبة العينات التي أعطت قيمة صفراً في اختبار الاليزا 0 titter 3,4%، وکانت نسبة العينات التي أعطت معيار أضداد أکبر من (5000) في الجمع الأخير للدم في عمر تسعة عشر أسبوعاً 76%.

نتائج المجموعة الثالثة:

تم الحصول على أفراد هذه المجموعة من أفراد المجموعة الأولى وکانت نتائج جمع عينات الدم کما هو موضح في المخطط البياني رقم 3:

مخطط بياني رقم 3: انحدار الأضداد النوعية للمجموعة الثالثة

وکما تم الحصول على نتائج أخرى في هذه المجموعة تم ذکرها في الجدول رقم 4:

جدول رقم 4: معلومات مختلفة عن صيصان المجموعة الثالثة

نتائج المجموعة الرابعة:

 تم الحصول على أفراد هذه المجموعة من أفراد المجموعة الثانية وکانت نتائج جمع عينات الدم کما هو موضح بالمنحني البياني رقم 5:

المنحني البياني رقم 5: المنحني البياني لانحدار أضداد المجموعة الرابعة:

وکما تم الحصول على نتائج أخرى في هذه المجموعة تم ذکرها في الجدول رقم 6:

جدول رقم 6: معلومات مختلفة عن صيصان المجموعة الرابعة

DISCUSSION

مناقشة النتائج

لا بد لنا أن نشير في البداية إلى ملاحظة وهي أننا لم نجد أي قطيع أمَّات خالٍ من الأضداد النوعية لمرض فقر الدم المعدي لذلک تم إجراء البحث على قطعان ايجابية الأضداد.

نلاحظ من خلال مقارنة مستوى الأضداد قبل التحصين وبعده أن مستوى الأضداد تضاعف ثلاث مرات على الأقل في القطيع المحصن بالکامل مقارنة مع القطيع المحصن بنسبة 20% الذي لم يظهر أي تطور يذکر في مستوى الأضداد بعد التحصين.

لوحظ أن متوسط معامل الاختلاف عند أمَّات المجموعة الأولى کان 24,5%، بينما کان في قطيع الأمَّات الثاني 54,4% وهذا يشکل فرقاً معنوياً بين النتيجتين (P<0.05)، وهذا يعکس تجانساً أعلى لمستويات الأضداد في قطيع الأمَّات الأول مقابل القطيع الثاني.

وجد الباحث کانال وزملاءه في الدراسة التي درست قطعان أمَّات محصنة وأخرى تعرضت لعدوى طبيعية أن معامل الاختلاف CV% کان في الأمَّات التي تعرضت للعدوى بشکل طبيعي کان ضعف ماهو عليه في الأمَّات المحصنة وقد علل ذلک بالتفاوت في معيار الأضداد بين العينات في ذات القطيع (Canal et al., 2004)، وهکذا نجد أن نتيجة القطيع المحصن بنسبة 20% في بحثنا قد اقتربت من هذه النتيجة مما يشير إلى أهمية حصول  کامل أفراد القطيع على الجرعة اللازمة من اللقاح للوصول إلى أفضل مستويات للأضداد وأعلى تجانس لها.

کما تمت مقارنة نسبة العينات التي أعطت مستوى أضداد أکبر من 5000 في اختبار الاليزا في الجمع الأخير للعينات لما لها من أهمية، حيث تعتبر الأمَّات الحاملة لهذه القيمة قادرة على نقل حماية جيدة لذريتها ضد مرض فقر الدم المعدي .(Canal et al., 2004; Roussan, 2006)، حيث بلغت نسبة 76% من عينات القطيع المحصن بنسبة 20%، مقابل 94% للقطيع المحصن بالکامل.أبحاث أخرى أجريت في البرازيل أشارت إلى أن النسبة المئوية للعينات التي أعطت معيار أضداد أکبر من 5000 کانت 99% في القطعان المحصنة، مقابل 52% في القطعان غير المحصنة (Canal et al., 2004)، بينما کانت نتائج أبحاث أخرى معاکسة لنتيجة الباحث کانال وزملائه، حيث أشار الباحث کوشکو وزملاؤه أن النسبة کانت 93% في قطعان الأمَّات غير المحصنة مقابل 75% في القطعان المحصنة (Khoshkhoo et al., 2011)، وقد يفسر هذا التفاوت في نتائج الأبحاث بتفاوت مستوى الأضداد قبل التحصين أو التعرض للعدوى الطبيعية.

کما دُرست نسبة العينات التي أعطت قيمة صفر في اختبار الاليزا حيث بلغت نسبتها في قطيع الأمَّات المحصن بالکامل 0% مقابل 3,4% في قطيع الأمَّات الأخر، لقد أشار الباحث کوشکو وزملاؤه 2011 أن هذه النسبة کانت 5% في القطيع الذي تعرض للعدوى بشکل طبيعي بينما کانت 0% في القطيع المحصن (Khoshkhoo et al., 2011)، إن نتيجة 3,4% في بحثنا تقترب من نتيجة القطيع غير المحصن في هذا البحث مما يشير إلى أن نسبة التحصين 20% لم تکن کافية لإعطاء کافة أفراد القطيع مستوى أضداد جيداً وحامياً مقارنة مع القطعان المحصنة بالکامل.

بالنسبة لقطعان دجاج اللحم التي حصل على صيصانها من أمَّات المجموعتين السابقتين، فقد وجد أن النسبة المئوية لمعيار الأضداد المنقولة من الأمَّات لصيصانها کانت 76% في الصيصان الناتجة من الأمَّات المحصنة بنسبة 100%، مقابل 59% في الصيصان الناتجة من الأمَّات المحصنة بنسبة 20% وهذا يعني أن النسبة کانت أعلى في الصيصان الناتجة من الأمَّات المحصنة بالکامل، لقد وجد الباحث کوشکو وزملاؤه (Khoshkhoo et al., 2011) أن هذه النسبة کانت 61% في الصيصان الناتجة من الأمَّات غير المحصنة مقابل 51% في الصيصان الناتجة من الأمَّات المحصنة، وربما يعزى الاختلاف في نتيجة البحثين إلى الاختلاف في مستوى الأضداد في قطعان الأمَّات وتجانسها والظروف الحقلية.

لقد کانت نسبة العينات التي أعطت قيمة صفراً في اختبار الاليزا في عمر يوم واحد في الصيصان الناتجة من الأمَّات المحصنة بالکامل 0%، مقابل 13,3% في الصيصان القادمة من الأمَّات المحصنة بنسبة 20%، لقد أشار الباحث کوشکو وزملاؤه أن هذه النسبة في الصيصان الناتجة من الأمَّات المحصنة 0%، بينما کانت في الصيصان الناتجة من أمَّات تعرضت للعدوى الطبيعية 12%، لقد تطابقت النسبة في القطعان المحصنة بالکامل بينما اقتربت نتيجة بحثنا 13.3% من نتيجة القطعان التي تعرضت للعدوى الطبيعية، مما يشير مرة أخرى أن نتيجة التحصين بنسبة 20% في الأمَّات وصيصانها کانت أقرب لنتيجة القطعان غير المحصنة.

کانت قيمة معامل الاختلاف CV% في اليوم الأول من عمر الصيصان الناتجة من الأمَّات المحصنة بالکامل 24,6%، مقابل ضعف هذه القيمة تقريبا في الصيصان الناتجة من القطيع الآخر 58,5%، وهذا يشکل فرقاً واضحاً بين القطيعين.

أشار الباحث کوشکو وزملاؤه (Khoshkhoo et al., 2011) أن هذه النسبة کانت في الصيصان الناتجة من أمات غير محصنة ضعف ما هي عليه في الصيصان الناتجة من الأمَّات المحصنة (44.7% مقابل 22%).

کما تم مقارنة النسبة المئوية لانخفاض معيار الأضداد خلال أربعة عشر يوماً، حيث کان 62% في الصيصان الناتجة من القطيع المحصن بالکامل، مقابل 66% في الصيصان الناتجة من القطيع المحصن بنسبة 20%، ونلاحظ أن النتيجة متقاربة، وقد يفسر ذلک بتعرض کلا القطيعين لنفس الظروف الحقلية أثناء فترة التجربة.

الاستنتاجات والتوصيات:

اعتماداً على ما سبق من نتائج دراستنا، فإننا نوصي باستخدام اللقاح الحي المضعَّف لفقر الدم المعدي في الأمَّات بجرعة کاملة ولجميع أفراد القطيع في عمر يتراوح بين (12-14) أسبوع من أجل تأمين حماية جيدة ومتجانسة للذرية الناتجة عنها، حيث أدى تحصين الأمَّات بجرعة کاملة ولجميع أفراد القطيع لرفع مستوى الأضداد فيها لثلاثة أضعاف ما کانت عليه قبل التحصين وأعطى تجانستً عالياً لمستويات الأضداد النوعية لفقر الدم المعدي فيها وأعطى نسبة مرتفعة من العينات ذات مستوى أعلى من 5000 بما لها من أهمية، وبالتالي کان للتحصين في الأمَّات بجرعة کاملة ولجميع أفراد القطيع انعکاسات ايجابية مهمة على الذرية من حيث مستوى وتجانس الأضداد الأميَّة المنتقلة لها، وکذلک انعدام والتقليل بشکل کبير من العينات التي کانت ذات قيمة صفراً باختبار الاليزا لما لها من خطورة على الصيصان خلال الأسابيع الأولى من عمرها، بينما کانت نتائج التحصين بنسبة 20% في الأمَّات وذريتها أقرب إلى نتائج قطعان الأمَّات غير المحصنة وذريتها.

نوصي بإجراء أبحاث للتعرف على انتشار المرض بالقطر العربي السوري والأعمار التي تتعرض فيها القطعان للعدوى.

REFERENCES

المراجــع

Canal, CW.; Ferreira, DJ.; Macagnan, M.; Fallavena, LCB.; Moraes, HLS. and Wald, VB. (2004): Prevalence of antibodies against chicken anaemia virus (CAV) in broiler breeders in Southern Brazil. Pesq. Vet. Brazil. 24: 89-92.

Chettle, NJ.; Eddy, R.K.; Wyeth, P.J. and Lister, S.A. (1989): An outbreak of disease due to chicken anaemia agent in broiler chickens in England.Vet. Rec.124: 211-215.

Engstrom, BE. (1999): Prevalence of antibody to chicken anaemia virus (CAV) in Swedish chicken breeding flocks correlated to outbreaks of blue wing disease (BWD) in their progeny. Acta Vet Scand 40: 97-107.

Gelderblom, H.; Kling, S.; Lurz, R.; Tischer, I. and Bulow, V. (1989): Morphological characterization of chicken anaemia agent (CAA). Arch Virol 109: 115-120.

Goryo, M.; Sugimura, H.; Matsumoto, S.; Umemura, T. and Itakura, C. (1985): Isolation of an agent inducing chicken anaemia. Avian Pathol 14: 483-496.

Koch, G.; Van roozelaar, D.J.; Verschueren, C.A.J.; Van dereb, A.J. and Noteborn, MHM. (1995): Immunogenic and protective properties of chicken anaemia virus proteins expressed by baculovirus.Vaccine13: 763-770.

Khoshkhoo, PH.; Akbariazad, G. and Tashakori, M. (2011): Comparison of CAV antibody titers in a vaccinated and naturally infected broiler breeder flocks. African Journal of Microbiology Research Vol. 5(20), pp. 3162-3165, 30 September, 2011.

Mcnulty, MS. (1991): Chicken anaemia agent: A review.Avian Pathol. 20: 187-203.

Otaki, Y.; Saito, K.; Tajima, M. and Nomura, Y. (1992): Persistence of maternal antibody to chicken anaemia agent and its effect on the susceptibility of young chickens. Avian Pathol. 21: 147-151.

Page-mante, A.; Saubi, N.; Artigas, C. and Espuna, E. (1997): Experimental evaluation of an inactivated vaccine against chicken anaemia virus. Avian Pathol. 26: 721-729.

Roussan, DA. (2006): Serological survey on the prevalence of chicken infectious anemia virus in commercial broiler chicken flocks in Northern Jordan. Int. J. Poult. Sci., 5: 544-546.

Yuasa, N. (1983): Propagation and infectivity titration of the Gifu-1 strain of chicken anemia agent in a cell line (MDCCMSB1) derived from Marek’s disease lymphoma. NatlInstAnim Health Q (Jpn)23: 13-20.

Yuasa, N. and II, K. (1986): Pathogenicity and Antigenicity of eleven isolates of chicken anaemia agent (CAA). Avian Pathol. 15: 639-645.

Yuasa, N.; Taniguchi, T. and Yoshida, I. (1979): Isolation and some characteristics of an agent inducing anemia in chicks. Avian Dis. 23: 366-385.

Yuasa, N.; Noguchi, T.; Furuta, K. and Yoshida, I. (1980a): Maternal antibody and its effect on the susceptibility of chicks to chicken anemia agent.Avian Dis. 24: 197-201.

Yuasa, N.; Taniguchi, T.; Imada, T. and Hihara, H. (1983b): Distribution of chicken anemia agent (CAA) and detection of neutralizing antibody in chicks experimentally inoculated with CAA. NatlInst Anim Health Q (Jpn)23: 78-81.